Microspheres suspended hybridization of quantification and its applications

    公开(公告)号:JP2009507472A

    公开(公告)日:2009-02-26

    申请号:JP2008527221

    申请日:2006-08-16

    IPC分类号: C12Q1/68

    摘要: 新規な懸濁ハイブリダイゼーション試験を用いてフローサイトメトリによる核酸コピー数を測定した。 該試験は、分光学的に異なるポリスチレンマイクロスフェアに接合された長さ100〜2304bpの範囲の低コピー(Ic)産生物で実証された。 本明細書に示される実施例では、これら接合マイクロスフェアは、細胞遺伝子学的細胞ペレットから抽出され、ビオチン−dUTPで標識されたゲノムDNA中の相同配列を検出するためのマルチハイブリダイゼーションプローブとして用いられた。 ハイブリダイゼーションは、フィコエリトリンで標識されたストレプトアビジンを用いて検出され、フローサイトメトリにより分析された。 コピー数の差異は、患者試料のゲノムDNA中の2倍体参照プローブをもつ試験プローブと、異常細胞株との平均蛍光強度の比較により区別された。 この試験は、染色体コンテクストに無関係に、2アレル参照配列由来の試験遺伝子座における単一アレルと3アレルの区別が可能である。 この試験は、相同標的の精確なコピー数決定のためにIcプローブが充分に特異的でかつ感度が高いため、遺伝子座特異的標的DNAの事前の増幅が必要な従来の方法の改良である。 その高い感度と精度のため、この試験は、核酸コピー数の測定のための、ヒト、疾患の動物モデルおよび溶液中のゲノムコピー数の測定、転写レベルの測定、法医学的DNA分析および農業における品質管理などの各種適用のために有用である。
    【選択図】図1

    Detection method of gene expression

    公开(公告)号:JP2009501005A

    公开(公告)日:2009-01-15

    申请号:JP2008519532

    申请日:2006-06-28

    IPC分类号: C12Q1/68 C12N15/09

    摘要: 本発明では、オリゴヌクレオチドプローブを生成する新規なアプローチと、これらのプローブを、アレイ又はビーズ上の被験オリゴヌクレオチドとハイブリダイズさせることによって、遺伝子発現のプロファイリングに使用するアプローチを提供する。 このアプローチでは、相補的なオリゴヌクレオチドプローブに、染料又はハプテン標識ddNTPと鋳型との混合物の溶液を使用して標識を行う。 次に、この標識したオリゴヌクレオチドプローブを、固相担体上の被験オリゴヌクレオチドとのハイブリダイゼーションに使用し、ハイブリダイゼーションの成否を、固相担体上の信号を利用して監視する。 このアプローチでは、プローブの内容がシンプルにしたため、ハイブリダイゼーションの時間が大幅に短縮される。 この方法は、少数の遺伝子、例えば、特定の疾病又は状態についての遺伝子のシグナチャーセットについて解析する場合に特に有用である。
    【選択図】 図1A

    How to increase the nucleotide signal by Raman scattering
    24.
    发明专利

    公开(公告)号:JP2007534291A

    公开(公告)日:2007-11-29

    申请号:JP2005509535

    申请日:2003-09-15

    摘要: 本明細書に開示の方法および装置は、増強ラマン分光法による核酸配列決定に関する。 本発明のある態様において、ヌクレオチドは、核酸に組み込まれる前にラマン標識に共有結合する。 他の態様においては、未標識核酸を使用する。 核酸をエキソヌクレアーゼ処理すると、標識または未標識ヌクレオチドが放出され、ラマン分光法によって検出される。 本発明の別の態様において、エキソヌクレアーゼ処理によって核酸から放出されるヌクレオチドはナノ粒子に共有結合で架橋し、表面増強ラマン分光法(SERS)、表面増強共鳴ラマン分光法(SERRS)、および/またはコヒーレント反ストークスラマン分光法(CARS)によって検出される。 本発明の他の態様は核酸配列決定のための装置に関する。

    摘要翻译: 本文公开的方法和装置涉及通过增强拉曼光谱进行的核酸测序。 在本发明的某些实施方案中,在掺入核酸之前,核苷酸与拉曼标记物共价连接。 在其它实施方案中,使用未标记的核酸。 核酸外切核酸处理导致通过拉曼光谱法检测的标记或未标记的核苷酸的释放。 在本发明的替代实施方案中,通过外切核酸酶处理从核酸释放的核苷酸与纳米颗粒共价交联,并通过表面增强拉曼光谱(SERS),表面增强共振拉曼光谱(SERRS)和/或相干反斯托克斯拉曼 光谱学(CARS)。 本发明的其它实施方案涉及用于核酸测序的装置。

    Active surface enhanced Raman spectroscopy (sers) metal-coated nano-crystalline silicon as the substrate

    公开(公告)号:JP2005524857A

    公开(公告)日:2005-08-18

    申请号:JP2004513716

    申请日:2003-05-16

    摘要: 本明細書に開示される方法と装置300は金属被覆ナノ結晶性多孔質シリコン基板240、340に関する。 本発明のある実施形態では、多孔質シリコン基板110、210は希薄弗化水素酸150中での陽極エッチングで形成し得る。 陰極電気移動、または公知の技術により、金または銀等のラマン活性金属による薄膜被膜を多孔質シリコン110、210上に被覆する。 金属被覆基板240、340はSERS、SERRS、ハイパーラマン分光および/またはCARSラマン分光に対し広い範囲の金属に富む環境を提供する。 本発明のある実施形態では、金属被覆基板240、340に金属ナノ粒子を添加してラマン信号を更に増強する事が出来る。 開示された方法および装置300を用い、多様な被分析試料を検出、同定および/または定量するためにラマン分光を使用し得る。

    摘要翻译: 本文公开的方法和装置300涉及使用金属涂覆的纳米晶体多孔硅衬底240,340的拉曼光谱。 在本发明的某些实施例中,多孔硅衬底110,210可以通过在稀氢氟酸150中的阳极蚀刻形成。 拉曼活性金属如金或银的薄涂层可以通过阴极电迁移或任何已知技术涂覆在多孔硅110,210上。 金属涂覆的基底240,340为SERS,SERRS,超拉曼和/或CARS拉曼光谱提供了广泛的金属富集环境。 在本发明的某些实施方案中,可以将金属纳米颗粒加入到金属涂覆的基底240,340中以进一步增强拉曼信号。 使用所公开的方法和装置300,可以使用拉曼光谱来检测,鉴定和/或定量各种各样的分析物。