How to enhance the secretion efficiency of a recombinant foreign protein in yeast expression system

    公开(公告)号:JP2009540820A

    公开(公告)日:2009-11-26

    申请号:JP2009516385

    申请日:2006-06-20

    IPC分类号: C12N1/19 C12N15/09

    CPC分类号: C12N15/81

    摘要: 酵母発現系における組み換え外来タンパク質の分泌効率を改善するための方法を提供する。 本方法は、酵母宿主を、ガラクトース誘導性プロモーター、分泌シグナル配列および外来タンパク質をコードする遺伝子を含んでなる組み換え外来遺伝子構築物で形質転換して、形質転換酵母株を構築すること;ならびに形質転換酵母株を、ガラクトース誘導性プロモーターの活性が制御される条件下で培養することを含んでなる。 外来タンパク質の分泌効率の改善は、細胞においてガラクトース誘導性プロモーターの誘導因子として機能するガラクトースのレベルの適切な制御を介して、従来のガラクトース誘導性プロモーターに基づく酵母発現系により蒙る組み換え外来タンパク質の過剰発現誘導性の不溶性沈殿を低減することによって達成することができる。 組み換え外来タンパク質の分泌効率の改善により、本発明は、酵母発現系における組み換え外来タンパク質の産生性の改善および産生コストの減少に寄与する。

    Mutant and a chemically conjugated polypeptides of granulocyte colony stimulating factor (g-csf)

    公开(公告)号:JP2009501789A

    公开(公告)日:2009-01-22

    申请号:JP2008522703

    申请日:2006-07-19

    CPC分类号: C07K14/535 A61K47/60

    摘要: 特異的な化学抱合用に設計したヒト顆粒球コロニー刺激因子(G−CSF)の変異型、およびがん治療におけるアジュバンドとしての使用されるその化学抱合体を提供する。 本発明は、配列番号1で同定されるアミノ酸配列を含むG−CSFの位置133のスレオニン(Thr)残基がシステイン(Cys)残基に置換されたG−CSF変異型を提供する。 加えて、本発明は、システイン(Cys)残基がG−CSFの位置135のグリシン(Gly)残基と位置136のアラニン(Ala)残基間に挿入されるG−CSF変異型を提供する。 さらに、本発明は、ポリエチレングリコール(PEG)のごとき生体適合性重合体がシステイン残基に結合した化学的に抱合された変異型G−CSFを提供し、該重合体は置換または挿入変異によって導入され、生体適合性重合体との抱合によってインビボの生物学的活性を減少することなくインビボの保持時間を増加させ、それにより最終的にインビボの生物学的活性を延長する。