公开(公告)号：US20100035768A1

公开(公告)日：2010-02-11

申请号：US12371543

申请日：2009-02-13

申请人： Daniel G. GIBSON ,  Hamilton O. SMITH ,  Clyde A. HUTCHISON ,  Lei YOUNG ,  J. Craig VENTER

发明人： Daniel G. GIBSON ,  Hamilton O. SMITH ,  Clyde A. HUTCHISON ,  Lei YOUNG ,  J. Craig VENTER

IPC分类号： C12P19/34 ,  C40B40/08 ,  C07H21/04

CPC分类号： C12P19/34 ,  C12N15/10 ,  C12N15/1027 ,  C12N15/64 ,  C12N15/66

摘要： The present invention relates to methods of joining two or more double-stranded (ds) or single-stranded (ss) DNA molecules of interest in vitro, wherein the distal region of the first DNA molecule and the proximal region of the second DNA molecule of each pair share a region of sequence identity. The method allows the joining of a large number of DNA fragments, in a predetermined order and orientation, without the use of restriction enzymes. It can be used, e.g., to join synthetically produced sub-fragments of a gene or genome of interest. Kits for performing the method are also disclosed. The methods of joining DNA molecules may be used to generate combinatorial libraries useful to generate, for example, optimal protein expression through codon optimization, gene optimization, and pathway optimization.

摘要翻译： 本发明涉及在体外连接两个或多个目的双链（ds）或单链（ss）DNA分子的方法，其中第一DNA分子的远端区域和第二DNA分子的近端区域 每对共享序列同一性区域。 该方法允许以预定顺序和取向连接大量DNA片段，而不使用限制酶。 其可以用于例如合成产生的感兴趣的基因或基因组的亚片段。 还公开了用于执行该方法的套件。 连接DNA分子的方法可用于产生组合文库，其可用于产生例如通过密码子优化，基因优化和途径优化的最佳蛋白质表达。