公开(公告)号：US5762939A

公开(公告)日：1998-06-09

申请号：US120607

申请日：1993-09-13

申请人： Gale Eugene Smith ,  Franklin Volvovitz ,  Bethanie Eident Wilkinson ,  Craig Stanway Hackett

发明人： Gale Eugene Smith ,  Franklin Volvovitz ,  Bethanie Eident Wilkinson ,  Craig Stanway Hackett

IPC分类号： C12N15/09 ,  A61K39/00 ,  A61K39/145 ,  A61P31/16 ,  A61P37/04 ,  C07K20060101 ,  C07K14/085 ,  C07K14/11 ,  C07K14/155 ,  C07K14/82 ,  C07K19/00 ,  C12N20060101 ,  C12N5/10 ,  C12N9/24 ,  C12N15/44 ,  C12N15/62 ,  C12N15/86 ,  C12N15/866 ,  C12P21/02

CPC分类号： A61K39/145 ,  A61K39/12 ,  C07K14/005 ,  C12N15/625 ,  C12N15/86 ,  A61K2039/55505 ,  A61K2039/70 ,  A61K39/00 ,  C07K2319/00 ,  C07K2319/02 ,  C07K2319/035 ,  C07K2319/036 ,  C07K2319/40 ,  C07K2319/91 ,  C12N2710/14143 ,  C12N2760/16122 ,  C12N2760/16134 ,  C12N2760/16234 ,  Y10S424/816

摘要： A method of preparing a recombinant influenza vaccine using DNA technology is provided. The resulting vaccine is a trivalent influenza vaccine based on a mixture of recombinant hemagglutinin antigens cloned from influenza viruses having epidemic potential. The recombinant hemagglutinin antigens are full length, uncleaved (HA0), glycoproteins produced from baculovirus expression vectors in cultured insect cells and purified under non-denaturing conditions. The process for cloning influenza hemagglutinin genes from influenza A and B viruses uses specially designed oligonucleotide probes and PCR. The cloned HA genes are then modified by deletion of the natural hydrophobic signal peptide sequences and replacing them with a new baculovirus signal peptide. A general approach for the efficient extraction and purification of recombinant HA protein produced in insect cells is also disclosed which can be adapted for the purification of rHA proteins from A sub-types and B type influenza viruses. The procedure produces substantially pure rHA which is a biologically active hemagglutinin, non-denatured, and suitable as a component in human or other animal influenza vaccines.

摘要翻译： 提供了使用DNA技术制备重组流感疫苗的方法。 所得疫苗是基于从具有流行潜力的流感病毒克隆的重组血凝素抗原的混合物的三价流感疫苗。 重组血凝素抗原是全长，未切割（HA0），由培养的昆虫细胞中的杆状病毒表达载体产生的糖蛋白，并在非变性条件下纯化。 从流感A和B病毒克隆流感血凝素基因的过程使用特别设计的寡核苷酸探针和PCR。 然后通过缺失天然疏水信号肽序列修饰克隆的HA基因，并用新的杆状病毒信号肽代替它们。 还公开了用于在昆虫细胞中产生的重组HA蛋白的有效提取和纯化的一般方法，其可适用于从A亚型和B型流感病毒纯化rHA蛋白。 该程序产生基本上纯的rHA，其是生物活性血凝素，非变性的，并且适合作为人或其他动物流感疫苗中的组分。