公开(公告)号：US5739002A

公开(公告)日：1998-04-14

申请号：US700356

申请日：1996-08-23

申请人： Raffaele De Francesco ,  Christina Failla ,  Licia Tomei

发明人： Raffaele De Francesco ,  Christina Failla ,  Licia Tomei

IPC分类号： A61K38/55 ,  A61P1/16 ,  A61P31/12 ,  C07K14/18 ,  C12N9/50 ,  C12N15/09 ,  C12Q1/37 ,  G01N33/573 ,  G01N33/576 ,  C07H21/04 ,  C12Q1/70

CPC分类号： C07K14/005 ,  G01N33/573 ,  G01N33/5767 ,  C12N2770/24222

摘要： This is a method for reproducing in vitro the serine protease activity associated with the HCV NS3 protein, that comprises using both of the sequences contained in NS3 and the sequences contained in NS4A. This method takes advantage of the ability of the HCV NS4A protein, or sequences contained therein, to act as a cofactor of the serine protease activity or more generally of the enzymatic activities associated with NS3. Optimal serine protease activity is obtained when NS4A is present in a molar ratio of at least 1:1 with NS3. NS3 and NS4A can also be incorporated in the reaction mixture as NS3-NS4A precursor, as this precursor will generate, by means of an autoproteolytic event, equimolar amounts of NS3 and NS4A. It is also possible to mutate the cleavage site between NS3 and NS4A in a procursor, so that NS4A remains covalently The sequences that do not influence the proteolytic activity of NS3 can subsequently be removed from protease activity.

摘要翻译： PCT No.PCT / IT95 / 00018 Sec。 371日期：1996年8月23日 102（e）日期1996年8月23日PCT提交1995年2月14日PCT公布。 公开号WO95 / 22985 日期1995年8月31日这是一种再现体外与HCV NS3蛋白相关的丝氨酸蛋白酶活性的方法，其包括使用NS3中包含的两个序列和NS4A中包含的序列。 该方法利用HCV NS4A蛋白或其中所含的序列的能力作为丝氨酸蛋白酶活性的辅因子或更一般地与NS3相关的酶活性。 当NS4A与NS3以至少1:1的摩尔比存在时，获得最佳的丝氨酸蛋白酶活性。 NS3和NS4A也可以作为NS3-NS4A前体引入反应混合物中，因为该前体将通过自体蛋白水解事件产生等摩尔量的NS3和NS4A。 也可能在前体中突变NS3和NS4A之间的切割位点，使得NS4A保持共价。随后可以从蛋白酶活性中除去不影响NS3的蛋白水解活性的序列。