VERFAHREN UND SYSTEM ZUR SCHNELLEN ISOLIERUNG VON NUKLEINSÄUREN DIREKT AUS VOLLBLUTPROBEN

    公开(公告)号:WO2022144428A1

    公开(公告)日:2022-07-07

    申请号:PCT/EP2021/087873

    申请日:2021-12-30

    Abstract: Gegenstand der Erfindung ist die Nutzung einer kommerziell verfügbaren Generation von Geräten, mit denen normalerweise Nukleinsäuren mittels magnetischer oder paramagnetischer Partikel aus einer biologischen Probe, u.a. direkt aus Vollblutproben, automatisiert aufgereinigt werden, für die Aufreinigung von Nukleinsäuren, allerdings ohne diese magnetischen oder paramagnetischen Partikel, sondern stattdessen mit aufgerauten Kunststoffmaterialien. Entscheidend dabei ist, dass die an die rauen Materialien gebundenen Nukleinsäuren mit einem Waschpuffer behandelt werden, der mindestens ein Lithiumsalz enthält.

    VERFAHREN ZUR SIMULTANEN ISOLIERUNG VON NUKLEINSÄUREN AUS SEDIMENTIERBAREN UND NICHT SEDIMENTIERBAREN BIOMOLEKÜLEN IN WASSERPROBEN

    公开(公告)号:WO2022180117A1

    公开(公告)日:2022-09-01

    申请号:PCT/EP2022/054561

    申请日:2022-02-23

    Inventor: HILLEBRAND, Timo

    Abstract: Gegenstand der Erfindung ist ein einfaches und sehr schnelles Verfahren zur simultanen Isolierung von Nukleinsäuren aus sedimentierbaren und nicht sedimentierbaren Biomolekülen in Wasserproben. Bei den Wasserproben kann es sich u.a. um Trinkwasser, Industriewasser, Oberflächenwasser oder auch Abwasser handeln. Bei den Biomolekülen handelt es sich um Bakterien, Bakteriophagen, Protozoen, Viren und um frei zirkulierende Nukleinsäuren (z.B. Plasmid DNA), die für Antibiotikaresistenzen kodieren. Erfindungsgemäß wird der Wasserprobe ein Polysaccharid-Derivat zugegeben und so die Biomoleküle angereichert. Nach Auflösung des Pellets und Lyse der Biomoleküle werden die Nukleinsäuren in bekannter Weise an eine feste Phase gebunden, gereinigt und eluiert.

    VERFAHREN ZUR AUTOMATISIERTEN ONLINE-DETEKTION MINDESTENS EINER BIOLOGISCHEN ZIELSUBSTANZ IN EINER FLÜSSIGKEIT UND ONLINE-ANALYSEGERÄT

    公开(公告)号:WO2022223314A1

    公开(公告)日:2022-10-27

    申请号:PCT/EP2022/059368

    申请日:2022-04-08

    Inventor: HILLEBRAND, Timo

    Abstract: Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur automatisierten Online-Detektion mindestens einer biologischen Zielsubstanz in einer Flüssigkeit, insbesondere Wasser oder Abwasser, mittels eines Online-Analysegeräts, umfassend: - Transportieren eines vorgegebenen ersten Volumens der Flüssigkeit über eine Probenzuleitung in eine Reaktionskammer einer Prozesseinheit des Online-Analysegeräts; - Aufkonzentrieren von in dem ersten Volumen der Flüssigkeit enthaltenen Biomolekülen durch Bindung an eine Vielzahl von Partikeln in der Reaktionskammer; - Transportieren der Partikel mit den daran gebundenen Biomolekülen in eine Detektionseinheit des Online-Analysegeräts, wobei die Detektionseinheit eine erste Mikrofluidikeinheit und eine mit der ersten Mikrofluidikeinheit fluidisch verbindbare zweite Mikrofluidikeinheit aufweist; - Freisetzen und/oder Isolieren von Nukleinsäuren aus den an die Partikel gebundenen Biomolekülen; - Transportieren eines die freigesetzten und/oder isolierten Nukleinsäuren umfassenden Eluats in die zweite Mikrofluidikeinheit; - Amplifizierung einer Ziel-Nukleinsäure in der zweiten Mikrofluidikeinheit; - Erfassen eines Messsignals, das eine von dem Fortschritt der Amplifizierung und/oder von einer Anzahl von Kopien der Ziel-Nukleinsäure in der zweiten Mikrofluidikeinheit abhängige Messgröße repräsentiert, und - Qualitative und/oder quantitative Bestimmung der Zielsubstanz in der Probe anhand des erfassten Messsignals durch eine Steuerelektronik des Analysegeräts. Die Erfindung betrifft außerdem ein Online-Analysegerät zur automatisierten Durchführung des Verfahrens.

    VERFAHREN UND TESTKIT ZUR PREISWERTEN UND RESSOURCENSPARENDEN EXTRAKTION VON NUKLEINSÄUREN

    公开(公告)号:WO2023089180A1

    公开(公告)日:2023-05-25

    申请号:PCT/EP2022/082644

    申请日:2022-11-21

    Inventor: HILLEBRAND, Timo

    Abstract: Die Erfindung betrifft ein Verfahren und Testkit zur preiswerten und ressourcensparenden Extraktion von Nukleinsäuren, wobei unter „ressourcensparend" die weitgehende Vermeidung von Plastik-Müll zu verstehen ist. Das Verfahren umfasst folgende Schritte: Zugabe eines Bindungspuffers zu einer Nukleinsäure enthaltenden Lösung, wobei die Nukleinsäuren an eine feste Phase angebunden werden, Waschen der angebundenen Nukleinsäuren, Eluieren der gewaschenen Nukleinsäuren, dadurch gekennzeichnet, dass als feste Phase ein Reaktionsgefäß dient, welche an seiner Innenseite Rillen oder einen Gewindeschnitt aufweist, woran die Anbindung der Nukleinsäuren erfolgt. Vor den Anbinden der Nukleinsäuren können diese mittels einer Lyse aus Zellen freigesetzt werden. Das Testkit umfasst mindestens ein Reaktionsgefäß, das an seiner Innenseite Rillen oder einen Gewindeschnitt aufweist, mindestens einen Bindungspuffer zum Anbinden der Nukleinsäuren an die Innenseite des Reaktionsgefäßes, mindestens einen Waschpuffer zum Waschen der angebundenen Nukleinsäuren, mindestens einen Elutionspuffer zum Eluieren der gewaschenen Nukleinsäuren und ggf. Lysepuffer.

    VERFAHREN ZUR AUFKONZENTRIERUNG MINDESTENS EINER ZIELSUBSTANZ IN EINEM FLÜSSIGKEITSVOLUMEN

    公开(公告)号:WO2023088991A1

    公开(公告)日:2023-05-25

    申请号:PCT/EP2022/082182

    申请日:2022-11-17

    Abstract: Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Erzeugung einer mindestens eine Zielsubstanz enthaltenden Probe aus einem ersten Flüssigkeitsvolumen (1) einer die mindestens eine Zielsubstanz enthaltenden Probeflüssigkeit durch Aufkonzentrierung der Zielsubstanz in dem ersten Flüssigkeitsvolumen (1), umfassend: - Zugeben eines Superabsorbers (2) zu dem ersten Flüssigkeitsvolumen (1) oder Zugeben des Flüssigkeitsvolumens (1) zu dem Superabsorber (2), - Inkubieren des aus dem Superabsorber (2) und dem ersten Flüssigkeitsvolumen (1) gebildeten ersten Gemisches, und - Entnehmen einer Probe des nach dem Inkubieren vorliegenden flüssigen Anteils (3) des ersten Gemisches. Die Erfindung betrifft auch ein Verfahren zur Erzeugung einer mindestens eine Zielsubstanz enthaltenden Probe aus einem ersten Flüssigkeitsvolumen (1) einer die mindestens eine Zielsubstanz enthaltenden Probeflüssigkeit, umfassend: - Zugeben eines Superabsorbers (2) zu dem ersten Flüssigkeitsvolumen (1) oder Zugeben des ersten Flüssigkeitsvolumens (1) zu dem Superabsorber (2), - Inkubieren des aus dem Superabsorber (2) und dem ersten Flüssigkeitsvolumen (1) gebildeten ersten Gemisches, - danach Zugeben eines zweiten Flüssigkeitsvolumens einer wässrigen Lösung zum verbliebenen Superabsorber, - Inkubieren des aus dem Superabsorber und dem zweiten Flüssigkeitsvolumen gebildeten zweiten Gemisches, - Entnehmen einer Probe des nach dem Inkubieren vorliegenden flüssigen Anteils des zweiten Gemisches.

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