本发明涉及一种无毒性破伤风毒素和诺维梭菌α毒素重组融合蛋白。本发明制备的重组融合蛋白，系采用经过密码子优化、破伤风毒素C片段与诺维梭菌α毒素的C末端以及N端的无毒性抗原表位的重组融合蛋白生产，即最大限度地保留两种毒素蛋白的免疫原性，又避免了天然毒素的生物安全隐患。该重组融合蛋白可用来制备破伤风梭菌和诺维梭菌亚单位疫苗，与我国目前商品化的破伤风梭菌和诺维梭菌天然毒素灭活疫苗相比，具有制备工艺简单、免疫剂量低、疫苗效力优良等优点，并大大降低了疫苗生产过程中的生物安全风险，是上述两种梭菌毒素疫苗升级换代的理想候选疫苗抗原；而且在与其它抗原共同制备联苗时，无需增大联苗的使用剂量，即可制备联苗。