本发明属于生物医药领域，公开了一种β-咔啉吲哚鎓盐及其制备方法与应用。本发明提供的β-咔啉吲哚鎓盐具有线粒体靶向和pH敏感荧光成像特性，具有通式Ⅰ和Ⅱ所示结构：本发明提供的β-咔啉吲哚鎓盐由9-R1-6-R4-1-R2-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚-3-甲醛与吲哚鎓盐或苯并吲哚鎓盐在加热条件下发生羟醛缩合反应得到，在肿瘤酸性微环境下能促进β-咔啉吲哚鎓盐的荧光在肿瘤组织释放，有利于通过pH响应和/或线粒体靶向进行肿瘤的体内外荧光成像，进而对于癌症细胞的诊断和治疗具有重要意义。