本发明涉及含分子内佐剂的重组非洲猪瘟抗原“鸡尾酒”疫苗及其应用，属于生物技术制药领域，所述的“鸡尾酒”疫苗含有OprI‑p30‑modified p54‑TT、OprI‑p72 epitope‑pE248R的N段氨基酸序列‑TT和OprI‑CD2v的N段氨基酸序列‑pEP153R的C段氨基酸序列‑TT 3种重组非洲猪瘟病毒抗原融合蛋白。本发明提供了上述3种重组非洲猪瘟病毒抗原融合蛋白的表达和纯化方法，以及用于配制上述“鸡尾酒”疫苗的组分比例和佐剂配伍。利用本发明制备的“鸡尾酒”疫苗可激发机体产生中和抗体和特异性细胞免疫应答，可作为一种预防非洲猪瘟的亚单位疫苗。