本发明公开了一种基于β‑乳糖苷酶响应的近红外一区多功能荧光链接体及制备方法和应用，制备方法包括以下步骤：2,3,4,6‑四‑O‑乙酰基‑α‑D‑吡喃半乳糖与5‑醛基水杨醛在K2CO3的作用下，得到带有二醛基的中间体；4‑(2‑甲基‑4‑苯并[cd]吲哚‑1‑基)丁烷‑1‑磺酸盐与带有二醛基的中间体在(CH3CO)2O作用下，得到基于β‑乳糖苷酶响应的近红外一区多功能链接体，本发明中的多功能荧光链接体可以对靶向抗肿瘤药物分子进行化学共价修饰构建“诊疗一体化”药物，进而通过肿瘤微环境的刺激，触发荧光点亮进行肿瘤部位的荧光标记，同时释放靶向抗肿瘤药物分子，从而达到对肿瘤的标记示踪以及治疗。