本发明公开了pAPN突变体和用于pAPN基因定点修饰的系统及应用。本发明提供了使pAPN蛋白第727位氨基酸残基发生突变的物质在如下任一中的应用：1)构建非疾病和诊断治疗目的的pAPN基因定点修饰的细胞系；2)制备抗猪传染性胃肠炎病毒的细胞等；本发明提供的用于pAPN基因定点修饰的系统能够对pAPN基因的两个靶位点进行有效酶切，实现pAPN第727位氨基酸的精准突变。在精确修饰pAPN基因的同时，能够避免破坏或改变pAPN的其余氨基酸的正常表达，因此在抵抗TGEV感染的基础上，最大程度上保留pAPN蛋白生理活性功能，并且具有适用范围广、基因编辑效率高等优点。