一种青霉素V酰化酶突变体、编码序列、重组表达载体、基因工程菌及应用

    公开(公告)号:CN109161540B

    公开(公告)日:2021-03-19

    申请号:CN201811135223.3

    申请日:2018-09-28

    Abstract: 本发明提供了一种青霉素V酰化酶突变体、编码序列、重组表达载体、基因工程菌及应用。对Bacillus sphaericus来源的青霉素V酰化酶进行突变,获得的突变体PVA‑3的比活提高了9倍,固定化活力由92U/g提高到820U/g,在浓度为30%的青霉素V钾盐条件下孵育1小时,活性残余89.1%;固定化突变体PVA‑3应用于pH6.0,25℃条件下裂解25%浓度的青霉素V制备6‑APA的反应时间由180分钟缩短到60分钟,底物转化率提高至99.5%以上,且连续使用600批次以上,活力无明显的损失,具有很好的操作稳定性。突变后的PVA‑3极大程度地降低了生产成本,提高了生产效率,更适合于工业化应用。

    一种合成用青霉素G酰化酶突变体及其在制备阿莫西林中的应用

    公开(公告)号:CN105274082A

    公开(公告)日:2016-01-27

    申请号:CN201510736957.7

    申请日:2015-11-03

    CPC classification number: C12Y305/01011 C12N9/84 C12P37/04

    Abstract: 本发明提供了一种合成用青霉素G酰化酶突变体及其在制备阿莫西林中的应用。通过计算机辅助设计结合定点饱和突变技术的半理性设计及定向进化的酶工程改造技术对木糖氧化无色杆菌来源的青霉素G酰化酶进行突变,获得了水解活力更低,合成活力更好,合成水解比值(S/H)更高、耐酸性更强和稳定性更好的青霉素G酰化酶突变体,可以更有效,快速地催化合成阿莫西林。本发明获得的突变体SPGA-4固定化酶水解活力下降了8.7倍,合成活力提高了5.6倍,S/H值提高了8倍,在pH2.0条件下60min保持79%的活力,采用10℃或20℃固体法催化合成阿莫西林,其中底物6-APA和D-HPM直接固体投料无需溶解,反应pH无需控制,底物转化率在99%以上,可连续使用300批次以上,具有很好的操作稳定性。

    一种高能磷酸化合物的制备方法

    公开(公告)号:CN104130283A

    公开(公告)日:2014-11-05

    申请号:CN201410310876.6

    申请日:2014-07-01

    Abstract: 本发明公开了一种高能磷酸化合物的制备方法,该方法是将五氧化二磷和工业磷酸混合均匀后,在混合体系中缓慢滴加有机酸酐搅拌反应;反应完成后,在反应液中加入碳酸盐和/或碳酸氢盐沉淀剂,搅拌,析出沉淀,过滤,高产率获得高纯度的高能磷酸化合物;该方法操作简单、原料利用率高、生产成本低、安全环保,满足工业化生产。

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