公开(公告)号：CN116121187A

公开(公告)日：2023-05-16

申请号：CN202210777800.9

申请日：2022-07-04

申请人： 河南省银丰生物工程技术有限公司 ,  银丰生物工程集团有限公司

发明人： 王小龙 ,  程志远 ,  李雯雯 ,  王梦军 ,  王彦

IPC分类号： C12N5/078 ,  C12N5/0789

摘要： 本发明公开了一种脐带血造血干细胞人工诱导分化为红细胞的方法，具体涉及生物医学技术领域，包括具体包括以下步骤，造血干细胞提取，在新生婴儿与胎盘分离后，立即提取脐带血内部的造血干细胞，并将造血干细胞放置在80％DMEM培养基内部，加入10％的胎牛血清，并放置在37℃、6％CO2培养箱内部进行常规培养，并备用。本发明利用扩增期对造成干细胞进行扩增、分化期对红细胞进行分化并且成熟期提高红细胞脱核成熟三种不同的方式对造血干细胞进行人工诱导，同时根据不同培养周期对造血干细胞以及红细胞进行培养，进而使分化后的红细胞数量产量大，而且成熟率高等优势，为目前人工造血等技术领域奠定了基础，具有实时性的意义。

公开(公告)号：CN111334474A

公开(公告)日：2020-06-26

申请号：CN202010117537.1

申请日：2020-02-25

申请人： 河南省银丰生物工程技术有限公司 ,  银丰生物工程集团有限公司

发明人： 程志远 ,  王彦 ,  李雯雯 ,  郭晓丹 ,  刘子屹

IPC分类号： C12N5/0797 ,  C12N5/079

摘要： 本发明公开了一种用于神经干细胞的体外移植培养方法，包括分离神经干细胞、神经干细胞体外扩增培养、观察神经干细胞表达、分离星形胶质细胞、干细胞接种组培养、观察细胞表达和统计分析。本发明的有益效果是：探索出新型神经干细胞的体外培养方法，简化培养流程，降低培养成本，建立新的神经干细胞的体外培养体系，且便于数据之间的对比，从而使得数据更加准确。

公开(公告)号：CN113116802A

公开(公告)日：2021-07-16

申请号：CN202010117814.9

申请日：2020-02-25

申请人： 河南省银丰生物工程技术有限公司 ,  银丰生物工程集团有限公司

发明人： 王彦 ,  赵允 ,  李欢欢

IPC分类号： A61K8/98 ,  A61K8/99 ,  A61K8/02 ,  A61Q19/08 ,  C12N5/0775

摘要： 本发明公开了一种基于细胞培养的干细胞冻干粉制备方法，包括提取充质干细胞、培育充质干细胞、收集培养液上清液、过滤和浓缩、冷冻和干燥。本发明的有益效果是：在提取充质干细胞时，利用输送泵通过导入管将储液箱中的待分离液吸出，经过滤网过滤留下所需的MSC液体，流出到培养基上，且培养套设置多个空腔能够用于容纳培养基，避免了运输过程中的感染等意外，同时也避免了互相感染的问题；充质干细胞培养的氧浓度为2‑3%，温度为37C・二氧化碳浓度为5%，在低氧浓度下，促进成体干细胞的扩増，缩短细胞倍増的周期；使用冻干粉保护剂，然后通过0.21um滤膜过滤除菌，保证制备冻干粉的高纯度，增强其修复功能。

公开(公告)号：CN113106060A

公开(公告)日：2021-07-13

申请号：CN202010117815.3

申请日：2020-02-25

申请人： 河南省银丰生物工程技术有限公司 ,  银丰生物工程集团有限公司

发明人： 王梦军 ,  杨志宽 ,  陈艳普 ,  张雪梅 ,  王彦

IPC分类号： C12N5/078 ,  A01N1/02

摘要： 本发明公开了一种PBMC细胞的体外培养方法，包括肝素抗凝常规采血、分离外周血淋巴细胞血、分离原始PBMC细胞、原始PBMC细胞培养、干扰素处理和细胞收集和冷存。本发明的有益效果是：采血时静脉血用ACD抗凝剂取代传统的肝素方法抗凝，防止抗凝后交接层混浊，洗涤后没有细胞的现象发生，培养基成分极大降低了由于长期体外培养可能出现的细胞活力减弱、微生物污染等事件的发生率，干扰素具有广谱抗病毒作用，通过诱导细胞合成抗病毒蛋白而发挥抑制病毒的作用，冷存则延长培养后细胞的保存时长。

公开(公告)号：CN109679902A

公开(公告)日：2019-04-26

申请号：CN201811560113.1

申请日：2018-12-20

申请人： 河南省银丰生物工程技术有限公司 ,  银丰生物工程集团有限公司

发明人： 朱学义 ,  魏天迪 ,  王彦 ,  王秋文 ,  曹启龙 ,  王豪东

IPC分类号： C12N5/0783

CPC分类号： C12N5/0638 ,  C12N2500/90 ,  C12N2501/06 ,  C12N2501/2302 ,  C12N2501/599

摘要： 本发明公开了一种基于cik免疫细胞的体外诱导扩增方法，包括收集外围血、cik免疫细胞分离、获取单个核细胞、配置诱导培养基和诱导扩增培养。本发明的有益效果是：步骤B中，离心操作为1500rpm离心五分钟，使cik免疫细胞能够彻底分离，提高分离率，激活培养基为添加了第一血浆、白介素-2和沙培林的无血清淋巴细胞培养基，且白介素-2的浓度均为900IU/ml，扩增培养基为添加了白介素-2和沙培林的无血清淋巴细胞培养基，且沙培林的浓度均为0.01KE/ml，cik免疫细胞的诱导和增殖速度更快，扩增效率高，获得的免疫细胞纯度高，步骤D中，所添加的胎牛血清胎牛血清体积浓度为15％，且还含有抗生素，能够提高cik免疫细胞扩增的效率，同时扩增后的cik免疫细胞具有较高的纯度。

公开(公告)号：CN109679899A

公开(公告)日：2019-04-26

申请号：CN201811560030.2

申请日：2018-12-20

申请人： 河南省银丰生物工程技术有限公司 ,  银丰生物工程集团有限公司

发明人： 朱学义 ,  徐峰波 ,  李雯雯 ,  王秋文 ,  程志远 ,  王彦

IPC分类号： C12N5/077 ,  C12N5/0775 ,  C12Q1/02 ,  G01N33/68 ,  C12Q1/6888

CPC分类号： C12N5/0655 ,  C12N5/0667 ,  C12N5/0668 ,  C12N2503/00 ,  C12Q1/6888 ,  C12Q2600/158 ,  G01N33/5005 ,  G01N33/68 ,  G01N2333/78

摘要： 本发明公开了一种人脂肪干细胞与脐带间充质干细胞成软骨能力的比较方法，包括脂肪干细胞分离与培养、脐带间充质干细胞分离与培养、脂肪干细胞成软骨诱导、脐带间充质干细胞成软骨诱导、脂肪干细胞与脐带间充质干细胞的检测和压力调控进行比对。本发明的有益效果是：分别对脂肪干细胞与脐带间充质干细胞建立完善的体外培养系统以及冻存方法，确保分离的脂肪干细胞与脐带间充质干细胞能在体外维持高活力，对脂肪干细胞与脐带间充质干细胞的细胞形态、生长增殖及成软骨能力进行检测，能够揭示二者骨分化能力的不同，均采用胶原酶消化法对脂肪干细胞与脐带间充质干细胞的组织中进行分离，能够分离出高活性、高纯度的脂肪干细胞。

公开(公告)号：CN109554288A

公开(公告)日：2019-04-02

申请号：CN201811588995.2

申请日：2018-12-25

申请人： 河南省银丰生物工程技术有限公司 ,  银丰生物工程集团有限公司

发明人： 朱学义 ,  王小龙 ,  张雪梅 ,  王豪东 ,  王彦 ,  魏天迪

IPC分类号： C12M1/22 ,  C12M1/12 ,  C12N5/0775

CPC分类号： C12M23/10 ,  C12M23/48 ,  C12M23/58 ,  C12M29/04 ,  C12N5/0662 ,  C12N2509/10

摘要： 本发明公开了一种MSC分离培养装置及其分离方法，包括培养套、培养皿、拉手、培养基、悬挂杆、圆形管、滴管、支撑座、第一接头、密封盖、储液箱、导线、第二接头、防尘套、导入管、导出管、开关、接线盒、输送泵、电机、电机开关、支撑架、支撑块、弧形卡口、转动柱、固定块、防尘塞、分离管、漏斗口、长管、储存室、第三接头、支撑圆柱、固定卡口、滤网以及第四接头。本发明输送泵通过导入管将储液箱中的待分离液吸出，通过导出管经过第四接头导入到分离管，经过所分离后经过滤网过滤留下所需的MSC液体，通过导管经过第三接头导入到圆形管，MSC液体从滴管流出到培养基上，避免了运输过程中的感染等意外，且培养套设置多个空腔能够用于容纳培养基。

公开(公告)号：CN113106056A

公开(公告)日：2021-07-13

申请号：CN202010117813.4

申请日：2020-02-25

申请人： 河南省银丰生物工程技术有限公司 ,  银丰生物工程集团有限公司

发明人： 王小龙 ,  王梦军 ,  张雪梅 ,  王彦 ,  凡苗振

IPC分类号： C12N5/0775 ,  C12N5/079 ,  C12Q1/02 ,  G01N33/543 ,  G01N33/68

摘要： 本发明公开了一种脐带间充质干细胞对星形胶质细胞诱导分化的方法，包括人脐带间充质干细胞培养、星形胶质细胞培养、hUC‑MSCs条件培养基制备、干预及实验分组、MTT比色法检测细胞增殖活力、酶联免疫吸附实验、免疫印迹检测和统计学处理。本发明的有益效果是：选取脐带来源的间充质干细胞和BV2星形胶质细胞为研究对象，观察正常环境和炎症环境下脐带间充质干细胞对星形胶质细胞活化状态的影响，便于分析脐血间充质干细胞对神经系统损伤的免疫调节作用及组织修复机制，且细胞培养环境模拟人体环境较为适宜，得到的数据通过多种检测方法，使得数据准确和全面。

公开(公告)号：CN113100224A

公开(公告)日：2021-07-13

申请号：CN202110206301.X

申请日：2021-02-24

申请人： 河南省银丰生物工程技术有限公司 ,  银丰生物工程集团有限公司

发明人： 王小龙 ,  李雯雯 ,  石珂 ,  王彦

IPC分类号： A01N1/02 ,  C12N5/0775

摘要： 本发明公开了一种间充质干细胞冻存液及其活性研究方法，包括进行hUC‑MSCs的分离、hUC‑MSCs的体外扩增、收集P3代细胞进行降温冻存、hUC‑MSCs复苏后与新鲜细胞进行比较统计和hUC‑MSCs的检测及鉴定。本发明的有益效果是：使用无血清培养贴壁法获得大量且纯度较高的MSCs，使用程序降温仪进行程序降温，降低对细胞的伤害，且保持较好的细胞活力，且得出冻存液比例为DMSO:FBS:DMEM=1:8.5:0.5时，冻存后活率最佳，复苏后形态及生长速率与正常新鲜细胞培养基本一致。

公开(公告)号：CN111593023A

公开(公告)日：2020-08-28

申请号：CN202010035680.6

申请日：2020-01-14

申请人： 河南省银丰生物工程技术有限公司 ,  银丰生物工程集团有限公司

发明人： 王小龙 ,  李雯雯 ,  王彦 ,  赵允 ,  张雪梅

IPC分类号： C12N5/0783

摘要： 本发明公开了一种T-reg细胞的体外培养方法，包括肝素抗凝常规采血、分离外周血淋巴细胞血、分离原始CD4+T细胞、原始CD4+T细胞培养、诱导原始CD4+T细胞、调节性T细胞扩增。本发明的有益效果是：利用特殊成分的培养基，不需要像传统扩増Treg的方法那样需要多个周期的培养，诱导的Treg表型和调节功能稳定，而且极大降低了由于长期体外培养可能出现的细胞活力减弱、微生物污染等事件的发生率，对培养后的原始CD4+T细胞采用雷帕霉素联合TGF-P通过Rapamycin联合TGF・B激活T细胞受体的信号通路在体外进行诱导，使之成为具有免疫抑制功能的调节性T细胞，且能够达到増加Foxp3的转录，进而促进调节T细胞的生成。