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    外周血CTL细胞的培养方法
    2.
    发明公开
    外周血CTL细胞的培养方法 无效

    公开(公告)号：CN109486761A

    公开(公告)日：2019-03-19

    申请号：CN201910045777.2

    申请日：2019-01-17

    申请人： 汇麟生物科技(北京)有限公司

    发明人： 施琳

    IPC分类号： C12N5/0783

    CPC分类号： C12N5/0638 ,  C12N2501/2301 ,  C12N2501/2302 ,  C12N2501/2307 ,  C12N2501/24 ,  C12N2501/51 ,  C12N2501/515 ,  C12N2533/50

    摘要： 本发明涉及一种外周血CTL细胞的培养方法。该方法包括：1)将由外周血分离得到的PBMC接种于包被有CD3抗体及CD28抗体的培养容器中进行培养；培养体系中的细胞因子为IFN-γ900U/mL～1100U/mL；2)向培养体系中加入IL-1α和IL-2，终浓度均为900U/mL～1100U/mL；培养体系中还加入有IL-7，终浓度为4～6ng/mL；3)换液，新的培养体系中的细胞因子为IL-2 900U/mL～1100U/mL，IL-7，2～3ng/mL，基础培养基为含4％～6％自体血浆的VIVO培养基。该方法CTL扩增效果好，且活化的CTL占比更高、T-reg细胞占比更低。

    一种基于PiggyBac载体的CD-133-CAR-T系统构建方法
    4.
    发明公开
    一种基于PiggyBac载体的CD-133-CAR-T系统构建方法 无效

    公开(公告)号：CN109022363A

    公开(公告)日：2018-12-18

    申请号：CN201810926459.2

    申请日：2018-08-15

    申请人： 马晓冬

    发明人： 马晓冬 ,  刘明 ,  林展雯 ,  李浔 ,  黄行许

    IPC分类号： C12N5/10 ,  C12N15/63 ,  A61K35/17 ,  A61P35/00

    CPC分类号： C07K16/2896 ,  A61K35/17 ,  A61P35/00 ,  C07K14/7051 ,  C07K2319/33 ,  C12N15/63 ,  C12N2501/2302 ,  C12N2501/24 ,  C12N2501/515 ,  C12N2510/00

    摘要： 本发明涉及CD‑133‑CAR‑T系统构建技术，特别是涉及一种基于PiggyBac载体的CD‑133‑CAR‑T系统构建方法，其是通过设计合成CD‑133‑CAR基因片段，然后将CD‑133‑CAR基因片段连接到Piggybac载体上得到Piggybac‑CAR‑CD‑133，再将Piggybac‑CAR‑CD‑133转入大肠杆菌中进行扩增，然后从大肠杆菌中提取质粒，并加入到人血清中分离的淋巴细胞中进行扩展培养，采用Nucleofector细胞转染系统转染共转染质粒Piggybac‑CAR‑CD‑133和Piggybac Transposase到T淋巴细胞，得到带有CD‑133‑CAR基因片段的T淋巴细胞。本发明采用非病毒类载体PiggyBac系统，避免了使用病毒载体存在的安全隐患，具有更高的安全性和有效性，更加适用于临床治疗；采用的Nucleofector细胞核技术，能够将外源基因直接导入到细胞核，克服了脂质体转染和普通电穿孔，必须依赖细胞分裂时才有可能使外源基因入核表达的缺陷，细胞具有更高的存活率和增殖效率。

    一种体外诱导扩增高杀伤活性γδT细胞的方法
    5.
    发明公开
    一种体外诱导扩增高杀伤活性γδT细胞的方法 有权 转让

    公开(公告)号：CN108949685A

    公开(公告)日：2018-12-07

    申请号：CN201810872610.9

    申请日：2018-08-02

    申请人： 吉林大学第一医院

    发明人： 牛超 ,  崔久嵬 ,  李薇

    IPC分类号： C12N5/0783

    CPC分类号： C12N5/0636 ,  C12N2500/38 ,  C12N2501/06 ,  C12N2501/2302 ,  C12N2501/2307 ,  C12N2501/2315

    摘要： 本发明涉及一种体外诱导扩增γδT细胞的方法，属于生物技术领域。该方法首先是通过淋巴细胞分离液获得外周血单个核细胞(PBMCs)，然后利用含有唑来膦酸、IL‑2、IL‑7和IL‑15的无血清培养基进行刺激培养3天；再用含有IL‑2、IL‑7和IL‑15的无血清培养基进行刺激扩增培养；当培养至7‑9天时候，加入尼克酰胺(Nicotinamide)以提高γδT细胞的抗肿瘤活性。本发明无需对PBMCs进行纯化，在培养14天即可获得纯度在90％以上的γδT细胞；尼克酰胺的加入，明显提高了γδT细胞的抗肿瘤活性。本发明可以将γδT细胞扩增1500倍以上，能够满足临床对γδT细胞数量的要求。本发明操作步骤简单，可操作性强，具有很好的推广价值。

    一种免疫细胞的分离方法及其应用
    7.
    发明公开
    一种免疫细胞的分离方法及其应用 无效

    公开(公告)号：CN108795862A

    公开(公告)日：2018-11-13

    申请号：CN201810541480.0

    申请日：2018-05-30

    申请人： 广州沙艾生物科技有限公司

    发明人： 徐智峰 ,  张新

    IPC分类号： C12N5/0784 ,  A61K35/14

    CPC分类号： C12N5/0639 ,  A61K35/14 ,  C12N2500/32 ,  C12N2501/20 ,  C12N2501/2302 ,  C12N2501/25 ,  C12N2509/00

    摘要： 本发明具体公开了一种免疫细胞分离方法，包括以下步骤：S1.在25℃环境中，外周血样本和培养基按2‑4:1比例稀释，并缓慢充分混匀，得到培养基和外周血混合的血液稀释液；S2.以上步骤的血液稀释液和淋巴细胞分离液按1:2‑6比例稀释，混合液加入离心管中，确保混合液形成明显分层，上层为血液稀释液，下层为淋巴细胞分离液以及其他离心计数步骤。本发明釆集外周全血分离免疫细胞，(1)避免大量釆集白细胞，可能会造成的大规模污染和细胞浪费；(2)操作简单可行；避免了患者反复抽血；(3)保证每次治疗用细胞都是新鲜分离的，避免了冻存对细胞的损伤。

    一种神经嵴干细胞制剂及其应用
    10.
    发明公开
    一种神经嵴干细胞制剂及其应用 无效

    公开(公告)号：CN108753693A

    公开(公告)日：2018-11-06

    申请号：CN201810428736.7

    申请日：2018-05-07

    申请人： 广州沙艾生物科技有限公司

    发明人： 徐智峰 ,  张新

    IPC分类号： C12N5/0735

    CPC分类号： C12N5/0606 ,  C12N2500/05 ,  C12N2500/32 ,  C12N2501/20 ,  C12N2501/2302 ,  C12N2501/25

    摘要： 本发明具体公开了一种神经嵴干细胞制剂及其应用，本发明的神经嵴干细胞制剂是通过体外培养神经管获得的，所述神经管来源于怀孕10天的小鼠胚胎。本发明的通过体外培养神经管获得的，神经管来源于怀孕10天的小鼠胚胎的神经嵴干细胞制剂，通过免疫荧光来鉴定神经嵴干细胞，P0代细胞和P3代细胞都分别表达了神经嵴的特性，并且没有表达神经干的特性，表明这些培养的细胞成功地在体外保持了小鼠神经嵴干细胞的特征。体外培养试验表明神经嵴干细胞可以在我们所提供的培养基中稳定的生长，维持细胞的正常繁殖。