一种靶向TTR的saCas9 sgRNA及其修饰方式

    公开(公告)号:CN119265190A

    公开(公告)日:2025-01-07

    申请号:CN202410897587.4

    申请日:2024-07-05

    Inventor: 张冰 杨平 吴硕

    Abstract: 本发明提供了一种靶向TTR的saCas9sgRNA及其修饰形式,所述经修饰的saCas9sgRNA包含20至22个核苷酸长度的向导RNA和77个核苷酸长度的sgRNA骨架,并且所述saCas9sgRNA的核苷酸序列包含至少一种化学修饰;并且所述靶向TTR的saCas9sgRNA包含在5’末端的向导RNA,所述向导RNA的序列是如SEQ ID NO:1‑9中任一种所示的核苷酸序列的至少20个、至少21个、或全部22个连续核苷酸。本发明提供的saCas9sgRNA可显著提高编辑活性、降低脱靶效率。

    动物细胞、动物细胞的制造方法及靶蛋白的制造方法

    公开(公告)号:CN113242907B

    公开(公告)日:2025-01-07

    申请号:CN201980082207.9

    申请日:2019-12-10

    Abstract: 本发明的课题为提供一种能够以高生产率制造靶蛋白的动物细胞、上述动物细胞的制造方法及使用上述动物细胞的靶蛋白的制造方法。根据本发明,提供一种:动物细胞,所述动物细胞具有编码靶蛋白的基因及编码SNAT2的外源基因即与启动子连接的外源基因,上述SNAT2过表达;上述动物细胞的制造方法;及使用上述动物细胞的靶蛋白的制造方法。

    表达moesin-EGFP的MDA-MB-231细胞株及其构建方法

    公开(公告)号:CN119242630A

    公开(公告)日:2025-01-03

    申请号:CN202411089373.0

    申请日:2024-08-09

    Abstract: 本发明提供了一种构建表达moesin‑EGFP的MDA‑MB‑231细胞株的方法。通过设计靶向moesin基因终止子区域的sgRNA,并构建含有LHA、Linker、EGFP和RHA序列的Donor质粒,该质粒在moesin蛋白和EGFP蛋白之间加入连接序列,以避免EGFP影响moesin蛋白功能。利用CRISPR‑Cas9基因编辑技术,将sgRNA、Cas9蛋白和线性化Donor质粒共同转入MDA‑MB‑231细胞。通过流式细胞术分选出表达moesin‑EGFP的纯合子细胞,并通过PCR和Western blot验证基因编辑和蛋白表达情况。该方法实现了moesin‑EGFP融合蛋白的稳定表达,达到实时监测细胞中内源性moesin表达的目的。该细胞株可用于研究moesin在细胞迁移和信号传导中的功能,具有广泛的应用前景。

    一种细胞裂解上清液及制备方法与应用

    公开(公告)号:CN119241681A

    公开(公告)日:2025-01-03

    申请号:CN202411309482.9

    申请日:2024-09-19

    Abstract: 本申请涉及分子生物学领域,具体公开一种细胞裂解上清液及制备方法与应用。其中细胞裂解上清液包括eIF2α突变体和GADD34截短体;所述eIF2α突变体为将eIF2α第52位氨基酸进行突变得到,所述GADD34截短体为将GADD34第1‑240位氨基酸敲除得到。本申请的细胞裂解上清液与正常的细胞裂解上清液相比,将可磷酸化的翻译起始因子突变避免其磷酸化,同时可以将磷酸化的翻译起始因子去磷酸化,保证细胞裂解上清液具有较高的翻译活性。

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