公开(公告)号：CN117737188A

公开(公告)日：2024-03-22

申请号：CN202311820244.X

申请日：2023-12-27

申请人： 中国农业科学院烟草研究所 ,  四川省烟草公司凉山州公司 ,  云南省烟草公司保山市公司

发明人： 申莉莉 ,  杨金广 ,  焦裕冰 ,  刘艳华 ,  李莹 ,  王英文 ,  江连强 ,  沈广材 ,  刘东阳 ,  郭应成 ,  刘国 ,  张富强

IPC分类号： C12Q1/18 ,  C12Q1/70 ,  C12N15/11

摘要： 本发明公开了一种鉴定烟草抗辣椒脉斑驳病毒的方法及应用，属于烟草抗病性筛选技术领域。本发明的方法是将待测烟草和感病对照播种育苗，待烟苗长至5～6片真叶时，在烟苗上部展开的叶片上接种含ChiVMV的接种液；接种后7～10天观察系统发病率；接种后21天，逐株调查发病级别；计算发病率、病情指数和抗性指数；根据一定的标准对待测烟草进行抗性评价。本发明通过毒株靶标性、接种一致性、材料高通量，来减少人为操作和识别误差，结果能够准确反映品种在田间的抗性水平。便于不同单位横纵结果可比性，适用于辣椒脉斑驳病毒的烟草苗期接种鉴定，特别适合从数量庞大的种质资源中筛选抗病品种。

公开(公告)号：CN111513077A

公开(公告)日：2020-08-11

申请号：CN202010453286.4

申请日：2020-05-25

申请人： 中国农业科学院烟草研究所 ,  中国烟草总公司四川省公司 ,  四川省烟草公司凉山州公司

发明人： 杨金广 ,  王凤龙 ,  徐翔 ,  李莹 ,  宋丽云 ,  申莉莉 ,  雷强 ,  冯长春 ,  李斌 ,  王勇 ,  刘东阳 ,  江连强

IPC分类号： A01N57/16 ,  A01N25/10 ,  A01P1/00 ,  C12N15/113 ,  C12N15/10

摘要： 本发明属于基因工程技术及其应用领域，为了解决目前缺乏抗TMV的高效RNAi纳米制剂，且药剂制备过程繁杂，dsRNA的稳定性及递送效率差等问题，提供了一种RNAi纳米制剂及其制备方法和在TMV防治中的应用，该RNAi纳米制剂由dsRNA和壳聚糖纳米材料制备而成，其中：dsRNA为筛选所得长度为313bp的高抗TMV的RdRP3基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述壳聚糖和1μg/μl的dsRNA的体积比是10：(1～6)。本发明的RNAi纳米制剂能够使dsRNA的稳定性更强，持久性更好，同时具有生物相容性好、生物可降解性好、对作物无药害、环境友好型等优点，在TMV病毒防治领域具有良好的应用前景。

公开(公告)号：CN113430233B

公开(公告)日：2023-01-24

申请号：CN202011513436.2

申请日：2020-12-18

申请人： 中国农业科学院烟草研究所 ,  云南省烟草公司红河州公司 ,  云南省烟草农业科学研究院

发明人： 杨金广 ,  袁莲莲 ,  宋丽云 ,  焦玉冰 ,  李莹 ,  申莉莉 ,  王凤龙 ,  黄坤 ,  夏振远

IPC分类号： C12P3/00 ,  A01N63/27 ,  A01N59/02 ,  A01P1/00 ,  A01P21/00 ,  C12R1/39

摘要： 本发明公开了一种荧光假单胞杆菌的纳米硒合成活性菌液、其制备方法及其应用，属于微生物及微生物制剂技术领域。本发明的荧光假单胞杆菌的纳米硒合成活性菌液；是由荧光假单胞杆菌进行生物发酵合成纳米硒后，由荧光假单胞杆菌及其合成的纳米硒组成的混合液；所述荧光假单胞杆菌为荧光假单胞杆菌KBD‑1；该菌株于2020年08月31日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC No.20567。本发明荧光假单胞杆菌的纳米硒合成活性菌液对作物病毒病具有较好的防治效果，为作物病毒病的防治提供新的微生物资源；此外，还对作物具有促生效果，且效果显著。

公开(公告)号：CN114058737A

公开(公告)日：2022-02-18

申请号：CN202111231803.4

申请日：2021-10-22

申请人： 中国农业科学院烟草研究所 ,  云南省烟草公司红河州公司 ,  云南省烟草农业科学研究院

发明人： 杨金广 ,  张万红 ,  蔺忠龙 ,  焦玉冰 ,  李莹 ,  申莉莉 ,  王凤龙 ,  刘春明 ,  夏振远

IPC分类号： C12Q1/70 ,  C12Q1/6844 ,  C12Q1/6804 ,  C12N15/113 ,  C12N15/11

摘要： 本发明提供了一种用于检测植物番茄斑萎病毒的crDNA、crRNA、试剂盒和方法，所述crDNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述crRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述试剂盒含有所述crDNA或者所述的crRNA、以及Cas13a蛋白和荧光探针。所述方法包括：提取待测的植物样品总RNA，后通过逆转录获得cDNA；以所述cDNA为模板扩增获得DNA扩增产物；将所述的扩增产物、crRNA、Cas13a蛋白和荧光探针和无酶水构成的检测反应体系进行检测。本发明具有成本低、可多次重复检测、方法简单、检测速度快、灵敏(最低检测极限达到10拷贝/uL)、特异形的特点。

公开(公告)号：CN113430233A

公开(公告)日：2021-09-24

申请号：CN202011513436.2

申请日：2020-12-18

申请人： 中国农业科学院烟草研究所 ,  云南省烟草公司红河州公司 ,  云南省烟草农业科学研究院

发明人： 杨金广 ,  袁莲莲 ,  宋丽云 ,  焦玉冰 ,  李莹 ,  申莉莉 ,  王凤龙 ,  黄坤 ,  夏振远

IPC分类号： C12P3/00 ,  A01N63/27 ,  A01N59/02 ,  A01P1/00 ,  A01P21/00 ,  C12R1/39

摘要： 本发明公开了一种荧光假单胞杆菌的纳米硒合成活性菌液、其制备方法及其应用，属于微生物及微生物制剂技术领域。本发明的荧光假单胞杆菌的纳米硒合成活性菌液；是由荧光假单胞杆菌进行生物发酵合成纳米硒后，由荧光假单胞杆菌及其合成的纳米硒组成的混合液；所述荧光假单胞杆菌为荧光假单胞杆菌KBD‑1；该菌株于2020年08月31日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC No.20567。本发明荧光假单胞杆菌的纳米硒合成活性菌液对作物病毒病具有较好的防治效果，为作物病毒病的防治提供新的微生物资源；此外，还对作物具有促生效果，且效果显著。

公开(公告)号：CN112592899A

公开(公告)日：2021-04-02

申请号：CN202011163297.5

申请日：2020-10-27

申请人： 中国农业科学院烟草研究所 ,  云南省烟草农业科学研究院 ,  云南省烟草公司红河州公司 ,  云南省烟草公司昆明市公司 ,  云南省烟草公司玉溪市公司

发明人： 杨金广 ,  余艳璧 ,  王凤龙 ,  夏振远 ,  黄坤 ,  李莹 ,  申莉莉 ,  刘春明 ,  蔺忠龙 ,  谢永辉 ,  张立猛 ,  杨海林 ,  王志江

IPC分类号： C12N5/20 ,  C07K16/10 ,  G01N33/569 ,  G01N33/577 ,  G01N33/558 ,  G01N33/58

摘要： 本发明提出了一种杂交瘤细胞株及其应用，该杂交瘤细胞株可分泌番茄斑萎病毒的单克隆抗体，该单克隆抗体用于制备免疫金标速测卡，其方法如下，步骤1、对番茄斑萎病毒重组蛋白进行纯化，步骤2、将纯化的番茄斑萎病毒重组蛋白免疫兔，获得多克隆抗体，步骤3、将纯化的番茄斑萎病毒重组蛋白免疫小鼠，然后通过细胞融合、克隆化筛选制备得到该单克隆抗体，最后制备小鼠腹水，经过纯化得到鼠抗番茄斑萎病毒单克隆抗体，步骤4、通过配对筛选，得到配对的单克隆抗体和多克隆抗体用于所述免疫金标速测卡，借此，本发明具有可将该免疫金标速测卡应用于番茄斑萎病毒进行快速、现场和灵敏的检测的优点。

公开(公告)号：CN218688848U

公开(公告)日：2023-03-24

申请号：CN202222839391.9

申请日：2022-10-27

申请人： 中国农业科学院烟草研究所 ,  中国烟草总公司四川省公司 ,  四川省烟草公司凉山州公司

发明人： 李莹 ,  李斌 ,  刘东阳 ,  王勇 ,  江连强 ,  申莉莉 ,  焦裕冰 ,  王凤龙 ,  杨金广

IPC分类号： B01F31/50

摘要： 本实用新型提供了一种混合效果好的制剂混匀装置，属于制药制剂用混匀装置技术领域，该混合效果好的制剂混匀装置包括储料装置、第一混合装置和第二混合装置，所述储料装置包括储料桶，所述储料桶内部沿圆周方向等距设置有多个储料管，所述储料管用以放置烟草抗病毒免疫诱抗产品制剂；所述储料桶的底部设置有空腔；所述第一混合装置设置于所述空腔内，所述第一混合装置用于进行烟草抗病毒免疫诱抗产品制剂的转动摇匀；所述第二混合装置固定安装于所述储料装置的底部，所述第二混合装置用于进行烟草抗病毒免疫诱抗产品制剂的晃动摇匀，本实用新型解决了在研制烟草抗病毒免疫诱抗产品时制剂不易充分混匀的问题。

公开(公告)号：CN118389535A

公开(公告)日：2024-07-26

申请号：CN202410534497.9

申请日：2024-04-30

申请人： 中国农业科学院烟草研究所(中国烟草总公司青州烟草研究所) ,  四川省烟草公司攀枝花市公司

发明人： 焦裕冰 ,  邵煜尊 ,  李莹 ,  闫芳芳 ,  杨金广 ,  张映杰 ,  申莉莉 ,  封俊 ,  王英文

IPC分类号： C12N15/29 ,  C07K14/415 ,  C12N15/82 ,  A01H6/82 ,  A01H5/00

摘要： 本发明公开了一种NbRbcS基因及其在抑制PMMoV病毒侵染植物中的应用，属于分子生物学技术领域。所述NbRbcS基因的核酸序列如SEQ ID NO:1所示。NbRbcS基因可以与P126‑Hel结构域互作，通过自噬过程降解P126‑Hel，从而增强寄主植物对病毒的抵抗作用。在烟草中沉默NbRbcS基因引起PMMoV病毒积累量的增多，促进病毒侵染；在烟草中提高NbRbcS基因的表达量可增强寄主对该RNA病毒的抵御能力，抑制病毒在寄主体内的侵染复制。因而，在抑制PMMoV病毒侵染烟草中具有较好的应用前景。

公开(公告)号：CN118291331A

公开(公告)日：2024-07-05

申请号：CN202410455553.X

申请日：2024-04-16

申请人： 中国农业科学院烟草研究所(中国烟草总公司青州烟草研究所)

发明人： 杨金广 ,  袁莲莲 ,  李莹 ,  焦裕冰 ,  申莉莉 ,  王英文

IPC分类号： C12N1/20 ,  C12P3/00 ,  A01N63/25 ,  A01N59/02 ,  A01P3/00 ,  A01P21/00 ,  C12R1/12

摘要： 本发明公开了一株耐受亚硒酸钠的多粘类芽孢杆菌及其应用，属于微生物及微生物制剂技术领域。本发明的多粘类芽孢杆菌为多粘类芽孢杆菌KZJ‑1菌株，菌种保藏号为CGMCCNo.30019。本发明的菌株KZJ‑1能够抑制烟草多种真菌类病原菌的侵染，生防试验结果显示对烟草真菌类病害的防效较好。同时，本发明的菌株KZJ‑1还可以合成纳米硒，由其制备的纳米硒合成活性菌液在促生及防治烟草黑胫病方面具有很高的应用价值。

公开(公告)号：CN114349834B

公开(公告)日：2023-08-15

申请号：CN202210014540.X

申请日：2022-01-07

申请人： 中国农业科学院烟草研究所(中国烟草总公司青州烟草研究所)

发明人： 杨金广 ,  宋丽云 ,  焦裕冰 ,  李莹 ,  申莉莉 ,  王凤龙

IPC分类号： C07K14/415 ,  C12N15/29 ,  C12N15/84 ,  C12N1/21 ,  A01H5/00 ,  A01H6/82 ,  C12R1/01

摘要： 本发明提供了一种富含半胱氨酸毒蛋白及其在抑制植物病毒侵染中的应用，所述富含半胱氨酸毒蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明通过VIGS技术沉默NbCRVP，从RNA、蛋白和PVY‑GFP荧光强度均说明沉默NbCRVP上调了本氏烟对TMV、PVY或CMV的敏感性、促进病毒的侵染。过表达NbCRVP抑制了TMV、PVY、CMV侵染或三种病毒混合侵染。这均说明NbCRVP作为一种新的潜在抗病基因，可以抵抗病毒的侵染。该蛋白能够抑制植物病毒的侵染，是烟草上一种潜在的抗病毒基因，NbCRVP可作为潜在的抗病毒蛋白应用，进一步丰富了抗病毒基因范畴。