公开(公告)号：CN116479031A

公开(公告)日：2023-07-25

申请号：CN202310255632.1

申请日：2023-03-16

Applicant: 华南农业大学 ,  岭南现代农业科学与技术广东省实验室

Inventor： 孙坚 ,  贺骞 ,  林卓宇 ,  张晓净 ,  廖晓萍 ,  刘雅红

IPC: C12N15/81 ,  C12N15/65 ,  C12N15/53 ,  C12N1/19 ,  A62D3/02 ,  C12N15/66 ,  C12R1/85 ,  A62D101/26 ,  A62D101/28

Abstract: 本发明属于基因工程技术领域，具体公开了一种利用布拉迪酵母表达四环素降解酶Tet(X)的方法与应用。通过LoxP/Cre重组酶系统构建尿嘧啶营养缺陷型酵母菌株S.boulardi/URA3‑/‑为表达宿主，将携带经序列优化后tet(X4)基因的质粒pCEV‑αf‑opt(X4)的Zeocin筛选标记ble改造为Uracil筛选标记URA3，同时构建表达载体中的α因子信号肽，实现外源蛋白Tet(X)的胞外分泌表达。以抗生素作为质粒稳定压力的菌株未表达出目的蛋白，而以Uracil为压力的菌株相比前者表达明显增强。构建后的工程酵母外源基因表达的Tet(X)在NADPH、Mg2+、O2的参与下表现出生物功能，对四代四环素类抗生素均具有高效的降解作用。

公开(公告)号：CN111172180A

公开(公告)日：2020-05-19

申请号：CN202010010949.5

申请日：2020-01-06

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 孙坚 ,  贺骞 ,  余军军 ,  崔超月 ,  陈冲 ,  廖晓萍 ,  刘雅红

IPC: C12N15/53 ,  C12N1/19 ,  C12N9/02 ,  A62D3/02 ,  C12R1/84 ,  A62D101/28

Abstract: 本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种四环素类抗生素降解基因tet(X)的优化及其在真核表达系统中的应用，为构建一种可分泌四环素类抗生素降解酶的真核表达系统，从而为四环素类抗生素的降解提供了一种新的途径，本发明在基因tet(X)序列的基础上经过优化得到适用于真核表达系统的tet(X)*序列，并首次使用pPIC9K载体将优化后的基因稳定的转入到毕赤酵母GS115中，构建得到一种工程酵母，该工程酵母具有表达Tet(X)蛋白的能力。通过工程酵母的表达效果试验可见，该工程酵母外源基因所表达的蛋白质在NADPH、Mg2+、O2的参与下表现出生物功能，对四环素类抗生素具有高效的降解作用。

公开(公告)号：CN116334115A

公开(公告)日：2023-06-27

申请号：CN202310255638.9

申请日：2023-03-16

Applicant: 华南农业大学 ,  岭南现代农业科学与技术广东省实验室

Inventor： 孙坚 ,  贺骞 ,  林卓宇 ,  张晓净 ,  廖晓萍 ,  刘雅红

IPC: C12N15/64 ,  C12N15/81 ,  C12N1/19 ,  C12N9/02 ,  A62D3/02 ,  C12R1/84 ,  A62D101/20

Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，具体公开了一种胞内表达四环素降解酶Tet(X)的基因工程酵母菌及应用。本发明以毕赤酵母GS115为表达宿主菌，以GAP或TEF1为启动子替代pPIC9K‑opt(X4)质粒的甲醇诱导型启动子，并删除质粒的分泌信号肽，构建得到能在胞内自主表达四环素降解酶Tet(X)的基因工程菌。该基因工程酵母裂解产物可在不额外添加辅酶NADPH的前提下能够高效降解不同环境样本中的四环素残留。通过基因工程菌制备的酶制剂具有良好的储存稳定性，同时对环境的pH和温度均具有良好的耐受性。该基因工程酵母生物降解策略具有低成本，高效率，低风险，应用范围广的优点。