公开(公告)号：CN116479031A

公开(公告)日：2023-07-25

申请号：CN202310255632.1

申请日：2023-03-16

Applicant: 华南农业大学 ,  岭南现代农业科学与技术广东省实验室

Inventor： 孙坚 ,  贺骞 ,  林卓宇 ,  张晓净 ,  廖晓萍 ,  刘雅红

IPC: C12N15/81 ,  C12N15/65 ,  C12N15/53 ,  C12N1/19 ,  A62D3/02 ,  C12N15/66 ,  C12R1/85 ,  A62D101/26 ,  A62D101/28

Abstract: 本发明属于基因工程技术领域，具体公开了一种利用布拉迪酵母表达四环素降解酶Tet(X)的方法与应用。通过LoxP/Cre重组酶系统构建尿嘧啶营养缺陷型酵母菌株S.boulardi/URA3‑/‑为表达宿主，将携带经序列优化后tet(X4)基因的质粒pCEV‑αf‑opt(X4)的Zeocin筛选标记ble改造为Uracil筛选标记URA3，同时构建表达载体中的α因子信号肽，实现外源蛋白Tet(X)的胞外分泌表达。以抗生素作为质粒稳定压力的菌株未表达出目的蛋白，而以Uracil为压力的菌株相比前者表达明显增强。构建后的工程酵母外源基因表达的Tet(X)在NADPH、Mg2+、O2的参与下表现出生物功能，对四代四环素类抗生素均具有高效的降解作用。

公开(公告)号：CN116334115A

公开(公告)日：2023-06-27

申请号：CN202310255638.9

申请日：2023-03-16

Applicant: 华南农业大学 ,  岭南现代农业科学与技术广东省实验室

Inventor： 孙坚 ,  贺骞 ,  林卓宇 ,  张晓净 ,  廖晓萍 ,  刘雅红

IPC: C12N15/64 ,  C12N15/81 ,  C12N1/19 ,  C12N9/02 ,  A62D3/02 ,  C12R1/84 ,  A62D101/20

Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，具体公开了一种胞内表达四环素降解酶Tet(X)的基因工程酵母菌及应用。本发明以毕赤酵母GS115为表达宿主菌，以GAP或TEF1为启动子替代pPIC9K‑opt(X4)质粒的甲醇诱导型启动子，并删除质粒的分泌信号肽，构建得到能在胞内自主表达四环素降解酶Tet(X)的基因工程菌。该基因工程酵母裂解产物可在不额外添加辅酶NADPH的前提下能够高效降解不同环境样本中的四环素残留。通过基因工程菌制备的酶制剂具有良好的储存稳定性，同时对环境的pH和温度均具有良好的耐受性。该基因工程酵母生物降解策略具有低成本，高效率，低风险，应用范围广的优点。

公开(公告)号：CN116479030A

公开(公告)日：2023-07-25

申请号：CN202310255631.7

申请日：2023-03-16

Applicant: 华南农业大学 ,  岭南现代农业科学与技术广东省实验室

Inventor： 孙坚 ,  贺骞 ,  林卓宇 ,  张晓净 ,  廖晓萍 ,  刘雅红

IPC: C12N15/81 ,  C12N15/55 ,  C12N1/19 ,  C12N15/64 ,  C12N9/18 ,  A61K48/00 ,  A61K38/46 ,  A61P39/02 ,  A23L33/135 ,  C12R1/85

Abstract: 本发明属于基因工程技术领域，具体公开了一种表达红霉素降解酶EreA的布拉迪酵母的构建及应用。本发明首先构建尿嘧啶营养缺陷型菌株S.boulardi/URA3‑/‑，将携带优化的opereA基因插入到含URA3基因的质粒pURA中，提取阳性转化子质粒转至S.boulardi/URA3‑/‑感受态，经过比对染色体和质粒介导的工程酵母表达水平筛选得到高水平表达的工程益生菌酵母。该工程酵母可高效表达红霉素降解酶EreA，具有生物功能，对体内和体外的红霉素均具有高效的降解作用。该工程酵母的使用不会影响红霉素在组织和血浆中的分布，对全身治疗作用无影响，且杜绝了临床重要耐药基因ereA的外泄。