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公开(公告)号：CN107557383A
公开(公告)日：2018-01-09
申请号：CN201710789234.2
申请日：2017-09-05
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种TYMV病毒诱导的十字花科内源基因沉默方法及其应用,以目标基因cDNA为模板进行PCR扩增，纯化连接载体，转化大肠杆菌，阳性克隆测序得到目的编码区全长CDS序列；根据测序后的结果选择序列为(T/A/G/C)TGA或(T/A/C)TAG或(T/A/C)TAA向后选择40bp序列；3’端加上其反向互补序列，两端再加入和线性化载体两端对应的同源序列长度为15bp的序列，合成双链DNA片段并与载体pTY-s融合连接，融合连接产物转化大肠杆菌，培养提取质粒，选择幼苗第一片真叶长出时，基因枪轰击，快速转入栽培土中培养。本发明载体构建容易，转染效率高，基因沉默效果明显，性状持久。
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公开(公告)号：CN107557381A
公开(公告)日：2018-01-09
申请号：CN201710949078.1
申请日：2017-10-12
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种白菜CRISPR-Cas9基因编辑体系的建立及其应用。设计两对sgRNA引物sGAvrIIF1/sGR1和sGF2/sGAvrIIR2，分别以pChimera sgRNA vector为模板进行PCR扩增，分别取纯化目的片段以sGAvrIIF1/sGAvrIIR2为引物进行融合PCR；将载体pCAS9-TPC与融合PCR产物酶切后融合连接，融合连接产物转化大肠杆菌，获得阳性菌落进行培养提取质粒得到植物基因编辑载体。通过本发明，可简单有效的实现了对白菜的基因编辑，对白菜转基因体系的建立也奠定了良好的基础。
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公开(公告)号：CN113549617B
公开(公告)日：2023-06-30
申请号：CN202110618334.5
申请日：2021-06-03
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开编辑不结球白菜CENH3基因的sgRNA及其CRISPR/Cas9载体和应用，本发明设计了不结球白菜CENH3基因的sg RNA，构建CRISPR/Cas9基因编辑载体，将连接了目的DNA片段的CRISPR/Cas9载体转入不结球白菜基因组中，通过基因编辑实现对不结球白菜CENH3基因的定点突变。本发明使用花粉纳米磁转化技术结合CRISPR/Cas9技术对不结球白菜内源基因CENH3进行编辑，通过植株抗性筛选、PCR检测、基因测序筛选得到CENH3单倍体诱导系，为在不结球白菜双单倍体育种中利用CENH3介导的染色体消除机制获得单倍体奠定基础。
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公开(公告)号：CN115918525A
公开(公告)日：2023-04-07
申请号：CN202211066284.5
申请日：2022-09-01
Applicant: 南京苏曼等离子工程研究院有限公司 , 南京农业大学
IPC: A01H1/06
Abstract: 本发明涉及一种高压电场低温等离子体激活农作物种子的方法及其应用，属于农作物种植技术领域。本发明提供了一种高压电场低温等离子体激活农作物种子的方法，包括如下步骤：(1)将农作物种子与水混合，浸泡4～24h，得到浸泡过的种子；(2)将所述浸泡过的种子在80～130kv电压下进行放电激活，得到激活的种子。利用该方法可以提高作物的产量、提高作物的耐热、抗病的性能，为后续得到优良的种子提供科学依据。
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公开(公告)号：CN109937876A
公开(公告)日：2019-06-28
申请号：CN201910220015.1
申请日：2019-03-22
Applicant: 南京农业大学
IPC: A01H4/00
Abstract: 本发明公开了一种提高不结球白菜小孢子胚胎诱导率的方法。一种提高不结球白菜小孢子胚胎诱导率的方法，包括：(1)采集花蕾；(2)培育小孢子胚胎：将步骤(1)采集的花蕾消毒清洗、润洗；将润洗后的花蕾研磨，过滤，离心，黄绿色沉淀用添加1号培养基稀释，进行热激处理，24-26℃暗培养14-16天，形成胚状体；1号培养基为添加0.04～0.08mg/L6-BA、10～20mg/L抗坏血酸和1mg/mL活性炭的NLN-13培养基；(3)成熟胚萌发成植株。本发明所述方法在能够保证出胚率的情况下，简化操作步骤，大大减少了操作时间，提高了植株生产效率。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN117121809A
公开(公告)日：2023-11-28
申请号：CN202210543449.7
申请日：2022-05-19
Applicant: 南京农业大学
IPC: A01H4/00
Abstract: 本发明公开了一种培育不结球白菜小孢子植株的方法。该方法包括如下步骤：(1)取样及花蕾挑选；(2)小孢子培育：用次氯酸钠对花蕾消毒，灭菌水清洗2遍，NLN‑13培养基润洗；润洗后的花蕾进行研磨、过滤、离心，黄绿色沉淀用NLN‑13培养基稀释并添加活性炭，加入伏立诺他分装到35mm培养皿，32.5℃热激24h，暗培养7～14天形成胚状体；(3)植株再生：胚状体补光振荡培养后移到改良固体1/2MS培养基中培育60d，炼苗移栽。(4)倍性鉴定：再生植株使用改良流式细胞仪倍性鉴定方法进行倍性鉴定。本发明所述方法能够提高不结球白菜小孢子出胚率，简化操作步骤缩短试验时间，提高再生植株存活率。
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公开(公告)号：CN113549617A
公开(公告)日：2021-10-26
申请号：CN202110618334.5
申请日：2021-06-03
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开编辑不结球白菜CENH3基因的sgRNA及其CRISPR/Cas9载体和应用，本发明设计了不结球白菜CENH3基因的sg RNA，构建CRISPR/Cas9基因编辑载体，将连接了目的DNA片段的CRISPR/Cas9载体转入不结球白菜基因组中，通过基因编辑实现对不结球白菜CENH3基因的定点突变。本发明使用花粉纳米磁转化技术结合CRISPR/Cas9技术对不结球白菜内源基因CENH3进行编辑，通过植株抗性筛选、PCR检测、基因测序筛选得到CENH3单倍体诱导系，为在不结球白菜双单倍体育种中利用CENH3介导的染色体消除机制获得单倍体奠定基础。
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公开(公告)号：CN110590729A
公开(公告)日：2019-12-20
申请号：CN201910904189.X
申请日：2019-09-24
Applicant: 南京农业大学
IPC: C07D311/62 , A61K47/42 , A61K31/352
Abstract: 本发明属于提高白菜花色苷热稳定性领域，涉及一种采用核桃肽提高白菜花色苷热稳定性的方法。包括以下步骤：选择生长状况良好的白菜，洗净备用；选取酸化的乙醇作为提取剂，将提取液和白菜在超声条件下提取花色苷，获得提取液；提取液离心来，分离上清液得到花色苷的粗提取液；浓缩来，得到花色苷粗提取浓缩液；将花色苷粗提取浓缩液中浸泡2.5-4小时，后再用蒸馏水冲洗大孔树脂，再用解吸液解吸大孔树脂，收集解吸液并浓缩，得到纯化的花色苷溶液；花色苷溶液中加入核桃肽溶液并加热来。本发明通过低浓度的核桃肽的作用来保存花色苷，并且能够较为显著的提高花色苷在一定温度的保存率，这对未来花色苷的保存和开发利用具有积极的作用。
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公开(公告)号：CN118147221A
公开(公告)日：2024-06-07
申请号：CN202410402075.6
申请日：2024-04-03
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12N15/84 , C12N15/113 , C12N9/22 , A01H5/00 , A01H6/20
Abstract: 本发明公开了一种快速获得不结球白菜高Vc含量双单倍体材料的方法，所述方法根据不结球白菜GGP基因的uORF序列设计sgRNA，构建CRISPR/Cas9基因编辑载体，使用根癌农杆菌侵染带柄子叶和下胚轴的方法转化不结球白菜单倍体诱导系，然后将含有基因编辑元件的单倍体诱导系与野生型不结球白菜育种材料杂交，后代经过表型和流式细胞仪鉴定和筛选得到不含基因编辑元件的不结球白菜双单倍体，然后对得到双单倍体进行基因编辑位点鉴定和Vc含量测定，快速获得不结球白菜高Vc含量双单倍体材料。采用本发明的方法可以快速获得纯合的突变体双单倍体材料，提高不结球白菜维生素C的含量，为白菜品质生物育种打下基础。
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