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公开(公告)号：CN113637781B
公开(公告)日：2022-07-19
申请号：CN202110965791.1
申请日：2021-08-23
Applicant: 安徽农业大学
IPC: C12Q1/689 , C12Q1/6844 , C12Q1/6837 , C12Q1/04 , C12Q1/10 , C12N15/11 , C12R1/21 , C12R1/42 , C12R1/46 , C12R1/01
Abstract: 本发明属于病菌检测技术领域，特别是涉及猪易感相关致病菌检测的LAMP引物组及基于此的试剂盒和LAMP芯片和应用。本发明提供了猪易感相关致病菌检测的LAMP引物组，所述LAMP引物组包括猪胸膜肺炎放线杆菌引物组、副猪嗜血杆菌引物组、猪霍乱沙门氏菌引物组、猪支气管败血波氏杆菌引物组、多杀性巴氏杆菌引物组等。本发明提供的LAMP引物组特异性高，同时进行检测猪易感病菌时不会出现交叉反应，能够精准的判断患病种类，并且具有良好的灵敏性。将上述LAMP引物组利用微流控芯片技术应用于检测中，可在等温条件下快速、高效、高特异性地扩增目的基因序列，并且在1h内完成扩增；具备的简便快捷的有点更适合基层适用性。
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公开(公告)号：CN108273052B
公开(公告)日：2020-05-22
申请号：CN201810060036.7
申请日：2018-01-22
Applicant: 安徽农业大学
IPC: A61K39/106 , A61P31/04 , C12N15/70 , C12N15/62
Abstract: 本发明属于基因疫苗技术领域，具体涉及一种拟态弧菌口服靶向表位基因疫苗，包括如下步骤，S1、设计疫苗靶点OVepis基因；S2、将S1中设计的疫苗靶点OVepis基因插入免疫载体草鱼CD74蛋白编码基因中II类分子相关肽段区的第261～280bp之间，方向从序列5’端到3’端，形成一个大小为1020bp的CD74(1‑261bp)‑Ovepis‑CD74(280‑711bp)嵌合基因，再用靶向递送载体大肠杆菌DH5α冻干菌蜕装载上述嵌合基因，即获得所述靶向表位基因疫苗；所述嵌合基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:20所示。本发明有益效果是：本发明的这种口服靶向表位基因疫苗不仅能防止体内核酸酶的降解、增加疫苗DNA编码基因在黏膜局部抗原呈递细胞内的表达，又可将表达和加工处理后的抗原肽高效呈递给T、B细胞，从而大大提高所述疫苗的免疫效果。
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公开(公告)号：CN107523542B
公开(公告)日：2019-06-25
申请号：CN201710816631.4
申请日：2017-09-12
Applicant: 安徽农业大学
IPC: C12N5/0786
Abstract: 本发明涉及一种草鱼肠巨噬细胞的分离、纯化与原代培养方法。分离方法为：无菌操作取出肠道中后段，除去肠道外脂肪与肠系膜，纵向剖开肠管清除粪便，使用无菌弯头镊子刮除草鱼肠黏液与上皮细胞层，刮除时间15min；将除去黏液和上皮细胞层的肠段处理成碎块置于胶原酶IV消化液中消化，获得固有层单细胞悬液；再用鱼类脏器单核细胞分离试剂盒分离肠巨噬细胞。纯化方法为：采用差异贴壁法纯化肠巨噬细胞。原代培养方法为：用含草鱼自体血清的RPMI 1640完全培养液培养肠巨噬细胞，待细胞贴壁后用含脂多糖的RPMI 1640完全培养液换液一次，以后每隔2天换液一次，细胞至少可存活20天。本发明建立了一种可操作性强、重复性好的草鱼肠巨噬细胞分离、纯化和原代培养方法。
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公开(公告)号：CN109116036A
公开(公告)日：2019-01-01
申请号：CN201811080628.1
申请日：2018-09-17
Applicant: 安徽农业大学
IPC: G01N33/68 , G01N33/535 , G01N33/543
CPC classification number: G01N33/6869 , G01N33/535 , G01N33/543 , G01N2333/5428
Abstract: 一种定量检测草鱼白介素-10的双抗体夹心ELISA方法，包括如下步骤：S1、检测抗原标准品的制备与纯化；S2、捕获抗体的制备与纯化；S3、检测抗体的制备与纯化；S4、草鱼白介素-10的双抗体夹心ELISA定量检测方法的建立。本发明的有益效果是：1、本发明以鼠抗gcIL-10抗体为捕获抗体，以兔抗gcIL-10酶标抗体为检测抗体，以原核表达并纯化的rgcIL-10为标准品，首次建立了一种定量检测gcIL-10的双抗体夹心ELISA方法。2、本发明所建立方法的特异性强，以草鱼其他细胞因子以及小鼠IL-10等为抗原进行双抗体夹心ELISA检测均无交叉反应，仅能检测到天然或重组表达的gcIL-10。
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公开(公告)号：CN107523542A
公开(公告)日：2017-12-29
申请号：CN201710816631.4
申请日：2017-09-12
Applicant: 安徽农业大学
IPC: C12N5/0786
CPC classification number: C12N5/0645 , C12N2500/34 , C12N2509/10
Abstract: 本发明涉及一种草鱼肠巨噬细胞的分离、纯化与原代培养方法。分离方法为：无菌操作取出肠道中后段，除去肠道外脂肪与肠系膜，纵向剖开肠管清除粪便，使用无菌弯头镊子刮除草鱼肠黏液与上皮细胞层，刮除时间15min；将除去黏液和上皮细胞层的肠段处理成碎块置于胶原酶IV消化液中消化，获得固有层单细胞悬液；再用鱼类脏器单核细胞分离试剂盒分离肠巨噬细胞。纯化方法为：采用差异贴壁法纯化肠巨噬细胞。原代培养方法为：用含草鱼自体血清的RPMI 1640完全培养液培养肠巨噬细胞，待细胞贴壁后用含脂多糖的RPMI 1640完全培养液换液一次，以后每隔2天换液一次，细胞至少可存活20天。本发明建立了一种可操作性强、重复性好的草鱼肠巨噬细胞分离、纯化和原代培养方法。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN106478777A
公开(公告)日：2017-03-08
申请号：CN201610867193.X
申请日：2016-09-29
Applicant: 安徽农业大学
CPC classification number: C07K7/08 , A61K39/085 , A61K2039/55566 , C07K2319/00 , C40B30/04
Abstract: 本发明涉及具有免疫保护性的金黄色葡萄球菌FnBPA-A蛋白的模拟表位肽、模拟表位肽组合物及其应用。本发明提供的2个免疫保护性模拟表位肽的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示，而模拟表位肽组合物则由SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的2种多肽组成，且SEQ ID NO:1所示多肽与SEQ ID NO:2所示多肽的质量配比为2:1。实验动物免疫保护性试验表明，本发明的2个模拟表位肽能够刺激机体产生高水平的特异性抗体，具有一定程度的免疫保护性，并且模拟表位肽组合物对黄色葡萄球菌感染的免疫保护效果好于FnBPA-A全蛋白。因此，本发明的模拟表位肽及其组合物可作为有效成分，用于金黄色葡萄球菌多表位疫苗的开发，预防金黄色葡萄球菌引起的奶牛乳腺炎。
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公开(公告)号：CN102914647A
公开(公告)日：2013-02-06
申请号：CN201210171724.3
申请日：2012-05-29
Applicant: 安徽农业大学
IPC: G01N33/559
Abstract: 本发明提供了一种琼脂扩散法检测鸭黄病毒抗体的方法，属于兽医传染病学和免疫学领域。所检测的鸭黄病毒为安徽某鸭场分离株，将病料接种SPF鸡胚，传至5代，获得稳定毒株，命名为鸭黄病毒AH-F10株。尿囊液经甲醛灭活加入白油佐剂乳化，制备灭活疫苗，连续两次免疫产蛋鸭获取鸭黄病毒阳性血清。该阳性血清与经甲醛灭活的鸭黄病毒液进行琼扩反应，可呈现清晰的沉淀带。通过不同缓冲液及缓冲液不同浓度对阳性血清琼扩效价的影响，确定该琼扩反应最适的缓冲液及缓冲液浓度。该方法可较为简便的诊断目前我国流行的鸭黄病毒病，做为流行病学调查的操作简便，效果明显，成本低廉的检测方法。
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公开(公告)号：CN1640494A
公开(公告)日：2005-07-20
申请号：CN200410094595.8
申请日：2004-11-18
Applicant: 安徽农业大学
Abstract: 一种含多种病毒抗原表位的禽多价核酸疫苗制备方法，属疫苗制备技术领域。其所要解决的技术问题是：提供一种安全、高效，且只进行一次免疫，就能使动物同时获得抗多种病毒的特异性免疫能力的疫苗的制备方法。其技术要点：分离获得多种病毒毒株，提取其蛋白抗原，用杂交瘤细胞技术制备和克隆相应特异性抗体，经组织细胞培养和动物实验确定获得保护性单克隆抗体。经噬菌体展示技术筛选并测定与相应抗体结合的病毒保护性抗原表位和编码抗原表位的核苷酸序列；经过分子操作将编码多种病毒保护性抗原表位的核苷酸片段插入真核表达质粒。该重组真核表达载体于鸡体内，可诱导产生针对该多种病毒抗原的特异性免疫反应，达到免疫保护的作用。
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公开(公告)号：CN113637781A
公开(公告)日：2021-11-12
申请号：CN202110965791.1
申请日：2021-08-23
Applicant: 安徽农业大学
IPC: C12Q1/689 , C12Q1/6844 , C12Q1/6837 , C12Q1/04 , C12Q1/10 , C12N15/11 , C12R1/21 , C12R1/42 , C12R1/46 , C12R1/01
Abstract: 本发明属于病菌检测技术领域，特别是涉及猪易感相关致病菌检测的LAMP引物组及基于此的试剂盒和LAMP芯片和应用。本发明提供了猪易感相关致病菌检测的LAMP引物组，所述LAMP引物组包括猪胸膜肺炎放线杆菌引物组、副猪嗜血杆菌引物组、猪霍乱沙门氏菌引物组、猪支气管败血波氏杆菌引物组、多杀性巴氏杆菌引物组等。本发明提供的LAMP引物组特异性高，同时进行检测猪易感病菌时不会出现交叉反应，能够精准的判断患病种类，并且具有良好的灵敏性。将上述LAMP引物组利用微流控芯片技术应用于检测中，可在等温条件下快速、高效、高特异性地扩增目的基因序列，并且在1h内完成扩增；具备的简便快捷的有点更适合基层适用性。
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公开(公告)号：CN108273052A
公开(公告)日：2018-07-13
申请号：CN201810060036.7
申请日：2018-01-22
Applicant: 安徽农业大学
IPC: A61K39/106 , A61P31/04 , C12N15/70 , C12N15/62
Abstract: 本发明属于基因疫苗技术领域，具体涉及一种拟态弧菌口服靶向表位基因疫苗，包括如下步骤，S1、设计疫苗靶点OVepis基因；S2、将S1中设计的疫苗靶点OVepis基因插入免疫载体草鱼CD74蛋白编码基因中II类分子相关肽段区的第261～280bp之间，方向从序列5’端到3’端，形成一个大小为1020bp的CD74(1-261bp)-Ovepis-CD74(280-711bp)嵌合基因，再用靶向递送载体大肠杆菌DH5α冻干菌蜕装载上述嵌合基因，即获得所述靶向表位基因疫苗；所述嵌合基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:20所示。本发明有益效果是：本发明的这种口服靶向表位基因疫苗不仅能防止体内核酸酶的降解、增加疫苗DNA编码基因在黏膜局部抗原呈递细胞内的表达，又可将表达和加工处理后的抗原肽高效呈递给T、B细胞，从而大大提高所述疫苗的免疫效果。
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