公开(公告)号：CN113186142A

公开(公告)日：2021-07-30

申请号：CN202110389910.3

申请日：2021-04-12

Applicant: 江南大学

Inventor： 沐万孟 ,  张文立 ,  万李 ,  朱莺莺

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12P19/00 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明提供了一种高效生产2′‑岩藻糖基乳糖的大肠杆菌工程菌株，属于合成生物学和微生物代谢工程技术领域。本发明以甘油为碳源，乳糖和L‑岩藻糖为底物，通过引入自组装短肽介导通路关键酶Fkp和FutC组装结合成酶复合物，从而减少代谢中间产物的流失提高产物生产效率，提高产物2′‑FL生产产量和产率。此外，还通过CRISPR/Cas9基因编辑系统敲除大肠杆菌中与底物降解以及中间产物分流相关的一系列基因，同时加强代谢通路中的辅因子的循环再生进一步提高2′‑FL的产量。使得到的大肠杆菌工程菌株在3L发酵罐条件下分批补料64小时可积累30.5g/L的2′‑FL，摩尔产率为0.661mol2′‑FL/mol岩藻糖和0.495mol2′‑FL/mol乳糖。对于工业化生产2′‑FL具有重要意义。

公开(公告)号：CN112680426A

公开(公告)日：2021-04-20

申请号：CN202011580654.8

申请日：2020-12-28

Applicant: 江南大学

Inventor： 沐万孟 ,  张文立 ,  田雨晴 ,  徐炜 ,  陈秋铭

IPC: C12N9/10 ,  C12N15/54 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P19/04 ,  C12P19/18 ,  A23L29/00 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及一种热稳定性提高的淀粉蔗糖酶突变体，属于酶工程领域。本发明将来源于微生物Calidithermus timidus DSM 17022的淀粉蔗糖酶(简称CT‑ASase)作为亲本，构建了四点突变体酶L382P/S414N/P618I/H631K(简称M45)。M45在65℃的半衰期由原来的23.58h提高到43.72h，在70℃的半衰期由原来的71min提高到110min，熔融温度由原来的74.29℃提高到76.44℃，最适反应温度由原来的55℃提高到60℃。这一发现对于工业化制备纯直链淀粉及转糖苷酶的工业化应用有重要的研究价值。

公开(公告)号：CN110396512B

公开(公告)日：2021-03-02

申请号：CN201910682366.4

申请日：2019-07-26

Applicant: 江南大学

Inventor： 沐万孟 ,  张文立 ,  倪大伟 ,  江波 ,  张涛

IPC: C12N9/26 ,  C12N15/56 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P19/04 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种菊糖蔗糖酶突变体及其应用，属于酶工程领域。本发明首先对微生物Lactobacillus gasseri DSM 20604来源的菊糖蔗糖酶进行截断处理，在5’端和3’端分别截断411和702个核苷酸，得到氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的中间序列，然后在SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的基础上，将第288位的天冬氨酸Asp突变为谷氨酸Glu后得到突变体酶D288E，突变体酶D288E的总酶活为326U/mg，与野生菊糖蔗糖酶(248U/mg)相比提高了31.45％，这一发现对于工业化制备菊糖具有重要的研究价值。

公开(公告)号：CN108034648B

公开(公告)日：2020-04-17

申请号：CN201810059404.6

申请日：2018-01-22

Applicant: 江南大学

Inventor： 沐万孟 ,  张文立 ,  黄嘉苇 ,  江波 ,  张涛

IPC: C12N9/90 ,  C12N15/61 ,  C12P19/24 ,  C12P19/02 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种热稳定性提高的D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶突变体，属于酶工程技术领域。本发明将来源于微生物Dorea sp.的D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶作为亲本，构建了突变体酶F154Y/E191D/I193F，该突变体的热稳定性和结构稳定性得到了提高：50℃和60℃的t1/2值分别达到20.47和3.09h；Tm值达到74.18℃。多点突变体的最适温度上升为75℃，与野生型酶相比提高了5℃。在最适催化条件下，酶催化底物D‑果糖生成D‑阿洛酮糖的相对酶活提高了3.8％，这一发现对于工业化制备D‑阿洛酮糖具有重要的研究价值。

公开(公告)号：CN108949857A

公开(公告)日：2018-12-07

申请号：CN201810831858.0

申请日：2018-07-26

Applicant: 江南大学

Inventor： 沐万孟 ,  江波 ,  郁书怀 ,  张涛 ,  朱莺莺 ,  程园园

IPC: C12P19/14 ,  C12P19/12 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种以菊糖为底物合成菊二糖的方法，属于基因工程技术领域。AcDFA‑IIIase作为一个双果糖酐水解酶能够催化其底物双果糖酐为菊二糖，此催化反应的最适pH是6.5和最适温度55℃。在这个条件下，AcDFA‑IIIase也能够催化菊糖，产物是双果糖酐和菊二糖。说明AcDFA‑IIIase具有连续催化菊糖的能力，即先转化菊糖为双果糖酐，然后双果糖酐进一步被转化为菊二糖。这种以廉价菊糖为底物合成菊二糖的方法为工业化生产菊二糖提供了极大的参考价值。

公开(公告)号：CN104774831B

公开(公告)日：2017-08-25

申请号：CN201510196113.8

申请日：2015-04-23

Applicant: 江南大学

Inventor： 江波 ,  张涛 ,  李美玲 ,  沐万孟 ,  缪铭

IPC: C12N11/14

Abstract: 本发明公开了一种基于固定化载体的β‑半乳糖苷酶的固定化方法，属于生物工程技术领域。本发明步骤是：（1）β‑半乳糖苷酶的制备；（2）氨基功能化磁性Fe3O4载体的制备；（3）氨基功能化磁性Fe3O4材料固定β‑半乳糖苷酶。本发明具体制备方法包括：以FeCl2·4H2O和FeCl3·6H2O为铁源，氨水为碱，CH3COONa为阴离子表面活性剂，1,6‑己二胺为氨基功能化试剂，利用化学共沉淀方法，一步合成表面带有氨基官能团的功能性磁性载体材料。借助该材料表面修饰的氨基官能团及良好的磁性，将其应用于β‑半乳糖苷酶的固定化。

公开(公告)号：CN106434611A

公开(公告)日：2017-02-22

申请号：CN201610895725.0

申请日：2016-10-14

Applicant: 江南大学

Inventor： 张涛 ,  江波 ,  黄凯 ,  沐万孟

IPC: C12N9/78 ,  C12N15/55 ,  C12N15/70 ,  C12P13/10 ,  C12R1/19 ,  C12R1/01

CPC classification number: C12N9/78 ,  C12N15/70 ,  C12N2800/101 ,  C12P13/10 ,  C12Y305/03001

Abstract: 一种以L-精氨酸为原料的L-鸟氨酸双酶耦合制备方法，属于生物工程技术领域。本发明涉及一株芽孢杆菌（Rummeliibacillus pycnus ）SK31.001，利用分子生物技术，将来源于该菌株的精氨酸酶异源过量表达。该精氨酸酶区别于其他精氨酸酶，在Ni2+催化下，在pH6.5环境下具有较高酶活。经镍柱纯化后得到的精氨酸酶与商业化的刀豆脲酶双酶耦合制备L-鸟氨酸。以L-精氨酸为底物，在40-50℃、pH6.5的反应条件下，经5h的转化反应，可得37.8 g/L的L-鸟氨酸。L-精氨酸的转化率达99.7%，且反应中生成的尿素被除去。本发明经济环保、速度快，产品纯度高，应用前景广泛。

公开(公告)号：CN104087537B

公开(公告)日：2016-04-13

申请号：CN201410327029.0

申请日：2014-07-10

Applicant: 江南大学

Inventor： 沐万孟 ,  江波 ,  汪潇 ,  张涛

IPC: C12N1/20 ,  C12N9/10 ,  C12P19/18 ,  C12P19/12 ,  C12R1/06

Abstract: 一株产菊糖果糖转移酶的菌株和用该酶生产双果糖酐III的方法，属于食品生物技术领域。本发明涉及一株产菊糖果糖转移酶的菌株，其分类命名为氯酚节杆菌（Arthrobacter chlorophenolicus）SK 33. 001，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2013387。以此节杆菌为出发菌株，以菊糖为碳源，与氮源及无机盐组成发酵培养基，发酵生产菊糖果糖转移酶。发酵培养基以菊糖，硝酸钠为主要碳源和氮源，发酵后经检测，在发酵液中菊糖果糖转移酶酶活达2-100U/mL。将菊糖果糖转移酶添加到1%-30%的菊糖溶液中生产双果糖酐III，转化3-24h，转化率达到75%以上。本发明所得双果糖酐III产品安全可靠，是一种很有市场潜力的功能性甜味剂。

公开(公告)号：CN105255772A

公开(公告)日：2016-01-20

申请号：CN201510744603.7

申请日：2015-11-06

Applicant: 江南大学

Inventor： 沐万孟 ,  江波 ,  朱莺莺 ,  张涛

IPC: C12N1/20 ,  C12N9/10 ,  C12P19/18 ,  C12P19/12 ,  C12R1/465

Abstract: 一株产菊糖果糖转移酶的菌株及其生产菊糖果糖转移酶的方法和应用，属于食品生物技术领域。本发明涉及一株产菊糖果糖转移酶的菌株，分类命名为链霉菌（Streptomyces davawensis）SK 39.001，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M2015352。以此链霉菌为出发菌株，以菊糖为碳源，与氮源及无机盐组成发酵培养基，发酵生产菊糖果糖转移酶。发酵培养基以菊糖，硝酸钠为主要碳源和氮源，发酵后经检测，在发酵液中菊糖果糖转移酶酶活达2-100U/mL。将菊糖果糖转移酶添加到1%-50%的菊糖溶液中生产双果糖酐I，转化3-24h，转化率达到75%以上。本发明所得双果糖酐I产品安全可靠，是一种很有市场潜力的功能性甜味剂。

公开(公告)号：CN104946577A

公开(公告)日：2015-09-30

申请号：CN201510294696.8

申请日：2015-06-02

Applicant: 江南大学

Inventor： 江波 ,  沐万孟 ,  何伟伟 ,  张涛

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/74 ,  C12P19/24 ,  C12P19/02 ,  C12R1/125

Abstract: 基于Cre/lox系统的无抗性基因染色体整合的表达D-阿洛酮糖3-差向异构酶的重组枯草芽孢杆菌的构建方法，属于酶基因工程技术领域。以整合载体pDGIEF为出发载体，删除原有的壮观霉素(spc)抗生素抗性基因，引入lox71-spc-lox66新的抗生素抗性基因片段，得质粒pDGI-7S6；将ATCC 35704的DPE酶基因，在其上游融合P43启动子构建P43-DPE，将其构建至pDGI-7S6中得pDGI-7S6-P43-DPE；再转化1A751感受态，在淀粉酶同源臂作用下，P43-DPE和lox71-spc-lox66整合至1A751染色体上；利用Cre/lox系统将spc抗性基因敲除，得一株食品级安全的产D-阿洛酮糖3-差向异构酶的1A751/lox-DPE，命名为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）SK38.002，保藏编号：CCTCC NO:M 2015258。发酵液总酶活达到6U/mL，具有重要的工业应用价值。