一种无毒Ⅱ型伪狂犬病毒毒株及其应用

    公开(公告)号:CN116024182B

    公开(公告)日:2024-04-05

    申请号:CN202310096073.4

    申请日:2023-01-18

    Applicant: 浙江大学

    Abstract: 本发明公开了一种无毒II型伪狂犬病毒毒株及其应用。本发明无毒II型伪狂犬病毒毒株由II型伪狂犬病毒野毒株的基因组中带有使RR1蛋白发生K759R突变的突变基因序列。本发明无毒II型伪狂犬病毒由新分离的II型伪狂犬病毒毒株PRV‑DX经过基因组突变,使UL39基因编码的蛋白RR1带有K759R点突变而获得,本发明无毒II型伪狂犬病毒致病力减弱,免疫原性强,用该无毒II型伪狂犬病毒制备活疫苗可对小鼠和猪等伪狂犬病毒易感动物提供有效免疫。

    一种无毒Ⅱ型伪狂犬病毒毒株及其应用

    公开(公告)号:CN116024182A

    公开(公告)日:2023-04-28

    申请号:CN202310096073.4

    申请日:2023-01-18

    Applicant: 浙江大学

    Abstract: 本发明公开了一种无毒II型伪狂犬病毒毒株及其应用。本发明无毒II型伪狂犬病毒毒株由II型伪狂犬病毒野毒株的基因组中带有使RR1蛋白发生K759R突变的突变基因序列。本发明无毒II型伪狂犬病毒由新分离的II型伪狂犬病毒毒株PRV‑DX经过基因组突变,使UL39基因编码的蛋白RR1带有K759R点突变而获得,本发明无毒II型伪狂犬病毒致病力减弱,免疫原性强,用该无毒II型伪狂犬病毒制备活疫苗可对小鼠和猪等伪狂犬病毒易感动物提供有效免疫。

    一种用于检测、鉴别猪伪狂犬病毒Ⅰ型和Ⅱ型的引物组合、试剂盒及方法

    公开(公告)号:CN113151586B

    公开(公告)日:2022-09-13

    申请号:CN202110081815.7

    申请日:2021-01-21

    Applicant: 浙江大学

    Abstract: 本发明公开了用于检测、鉴别猪伪狂犬病毒Ⅰ型和Ⅱ型的引物组合、试剂盒及方法。所述引物组合包括:上游引物Ⅰ:5’‑GAAGCCCCCGCGGAACAA‑3’,上游引物Ⅱ:5’‑CGCGGCCTCCACGCCCGC‑3’,下游引物:5’‑GCGAGGGAGGCGTTGGCG‑3’,其中,上游引物Ⅰ与下游引物配合用于扩增Ⅰ型猪伪狂犬病毒获得283bp序列,上游引物Ⅱ与下游引物配合用于扩增Ⅱ型猪伪狂犬病毒获得351bp序列。本研究通过生物信息学分析方法明确可用于基因分型的gC靶基因,并首次利用AS‑PCR原理来设计分型引物,并通过实验筛选到特异性分型的上游引物,而共用保守下游引物,进而减少了体系中的引物种类与数量,降低错配的可能,从而提高扩增效率,最终建立了灵敏度为104的单重PCR和灵敏度为104的双重PCR检测体系。

    一种非洲猪瘟病毒基因II型和非II型的快速鉴别方法及其应用

    公开(公告)号:CN114645099A

    公开(公告)日:2022-06-21

    申请号:CN202210140250.X

    申请日:2022-02-16

    Applicant: 浙江大学

    Abstract: 一种非洲猪瘟病毒基因II型和非II型的快速鉴别方法及其应用,本发明对B646L基因的特异性差异位点1500位核苷酸进行检测,非洲猪瘟病毒基因II型为C,基因非II型为T。通过设计病毒不同基因型差异位点的特异性引物来有效区分非洲猪瘟病毒基因II型和非II型。筛选得到的引物对非洲猪瘟病毒基因II型的扩增效率高,对非洲猪瘟病毒基因非II型扩增效率低,不需通过测序即可判断非洲猪瘟病毒基因型为II型或非II型,检测速度快,成本低。

    一种可翻译蛋白的环形RNA表达载体及构建方法和表达方法

    公开(公告)号:CN118109472A

    公开(公告)日:2024-05-31

    申请号:CN202410425230.6

    申请日:2024-04-10

    Applicant: 浙江大学

    Abstract: 本发明属于分子生物学技术领域,具体涉及一种可翻译蛋白的环形RNA表达载体及构建方法和表达方法。本发明提供了一种环形RNA过表达骨架,包括以下依次连接的结构:上游同源臂序列、上游促环化序列、第一酶切位点、间隔序列、IRES序列、第二酶切位点、下游促环化序列和下游同源臂序列。本发明所述环形RNA过表达骨架可以使表达的环形RNA具备蛋白翻译能力,将需要环化的基因线性序列通过酶切位点重组至装载有表达骨架的真核表达载体中,然后将重组质粒转染至细胞即可使表达的目标环形RNA分子翻译蛋白。本发明构建的环形RNA过表达骨架及表达载体提供了一种表达具有蛋白翻译功能环形RNA的工具。

    一种高灵敏TaqMan实时荧光定量PCR检测核酸的方法

    公开(公告)号:CN116732150A

    公开(公告)日:2023-09-12

    申请号:CN202310872773.8

    申请日:2023-07-17

    Applicant: 浙江大学

    Abstract: 本发明公开了一种高灵敏TaqMan实时荧光定量PCR检测核酸的方法,属于痕量检测技术领域。本发明提供了一种高灵敏TaqMan实时荧光定量PCR检测核酸的方法,包括以下步骤:根据待测核酸设计特异性引物和至少1条探针,利用所述待测核酸、特异性引物和至少1条探针构建高灵敏TaqMan实时荧光定量PCR体系,进行高灵敏TaqMan实时荧光定量PCR反应。本发明成功建立一种高灵敏TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,重复性良好,且检测灵敏度高,特异性好。

    一种用于检测、鉴别猪伪狂犬病毒Ⅰ型和Ⅱ型的引物组合、试剂盒及方法

    公开(公告)号:CN113151586A

    公开(公告)日:2021-07-23

    申请号:CN202110081815.7

    申请日:2021-01-21

    Applicant: 浙江大学

    Abstract: 本发明公开了用于检测、鉴别猪伪狂犬病毒Ⅰ型和Ⅱ型的引物组合、试剂盒及方法。所述引物组合包括:上游引物Ⅰ:5’‑GAAGCCCCCGCGGAACAA‑3’,上游引物Ⅱ:5’‑CGCGGCCTCCACGCCCGC‑3’,下游引物:5’‑GCGAGGGAGGCGTTGGCG‑3’,其中,上游引物Ⅰ与下游引物配合用于扩增Ⅰ型猪伪狂犬病毒获得283bp序列,上游引物Ⅱ与下游引物配合用于扩增Ⅱ型猪伪狂犬病毒获得351bp序列。本研究通过生物信息学分析方法明确可用于基因分型的gC靶基因,并首次利用AS‑PCR原理来设计分型引物,并通过实验筛选到特异性分型的上游引物,而共用保守下游引物,进而减少了体系中的引物种类与数量,降低错配的可能,从而提高扩增效率,最终建立了灵敏度为104的单重PCR和灵敏度为104的双重PCR检测体系。

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