一种API5基因敲除THP-1细胞系及其构建方法与干扰载体

    公开(公告)号:CN118895314A

    公开(公告)日:2024-11-05

    申请号:CN202411188603.9

    申请日:2024-08-28

    Applicant: 浙江大学

    Abstract: 本发明公开了一种API5基因敲除的THP‑1细胞系及其构建方法与干扰载体。本发明提供的特异性靶向API5的引物序列SEQ ID No.1和SEQ ID No.2、API5干扰载体及其重组慢病毒可为多种类型的API5基因敲除细胞系构建提供基础。本发明首次公开了API5基因的新功能,它参与抗病毒天然免疫以及dsRNA介导的细胞凋亡通路的调控。此外,本发明提供的API5基因敲除的THP‑1细胞为API5基因功能的研究提供了一种强有力的细胞模型,可用于体外探究API5在调控细胞凋亡、免疫、炎症、病毒感染及癌症等的研究,可以用于药物筛选和制备,应用前景广泛。

    一种环形RNA高效表达载体及其应用

    公开(公告)号:CN116694666A

    公开(公告)日:2023-09-05

    申请号:CN202310830730.3

    申请日:2023-07-07

    Applicant: 浙江大学

    Abstract: 本发明公开了一种环形RNA高效表达载体,其具有如SEQ ID NO.1所述的核苷酸序列,包括长度为92bp的上游骨架序列、长度为75bp的下游骨架序列和位于二者间用于插入待环化基因的酶切位点EcoRI,表达框架全长仅为173bp,本发明构建的环形RNA表达载体能够使外源插入序列高效地表达环形RNA,为环形RNA的获得提供了一种高效表达工具,在保证circRNA高效环化的前提下,对其成环所需的上下游侧翼序列的长度进行了高度优化,进一步降低侧翼序列带来的剪接副产物复杂度。

    一种鸡传染性支气管炎病毒QX型毒株鉴别检测试剂盒

    公开(公告)号:CN108950068B

    公开(公告)日:2021-05-07

    申请号:CN201810788384.6

    申请日:2018-07-18

    Applicant: 浙江大学

    Abstract: 本发明涉及生物检测技术领域,旨在提供一种鸡传染性支气管炎病毒QX型毒株鉴别检测试剂盒。该试剂盒包括两对引物,分别是用于扩增传染性支气管炎病毒的通用引物和用于特异性扩增QX基因型毒株的引物;其中,用于特异性扩增QX基因型毒株的引物的序列如如SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示。本发明通过设计QX基因型的特异性引物建立有效的RT‑PCR检测方法,仅需通过一次RT‑PCR反应就能达到对QX基因型的IBV进行分型检测的目的。该试剂盒在同一PCR反应条件下,将2对引物加入同一个PCR体系中,既能有效地检测出临床样品或鸡胚尿囊液中的IBV,也能特异性地将QX型基因型的IBV区分出来。该检测方法快速高效、准确,对于指导疫苗的选用以及IB的快速防控都具有很大的意义。

    一种鸡传染性支气管炎病毒QX型毒株鉴别检测试剂盒

    公开(公告)号:CN108950068A

    公开(公告)日:2018-12-07

    申请号:CN201810788384.6

    申请日:2018-07-18

    Applicant: 浙江大学

    CPC classification number: C12Q1/701 C12Q1/686 C12Q2565/125 C12Q2521/107

    Abstract: 本发明涉及生物检测技术领域,旨在提供一种鸡传染性支气管炎病毒QX型毒株鉴别检测试剂盒。该试剂盒包括两对引物,分别是用于扩增传染性支气管炎病毒的通用引物和用于特异性扩增QX基因型毒株的引物;其中,用于特异性扩增QX基因型毒株的引物的序列如如SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示。本发明通过设计QX基因型的特异性引物建立有效的RT‑PCR检测方法,仅需通过一次RT‑PCR反应就能达到对QX基因型的IBV进行分型检测的目的。该试剂盒在同一PCR反应条件下,将2对引物加入同一个PCR体系中,既能有效地检测出临床样品或鸡胚尿囊液中的IBV,也能特异性地将QX型基因型的IBV区分出来。该检测方法快速高效、准确,对于指导疫苗的选用以及IB的快速防控都具有很大的意义。

    一种快速构建禽传染性支气管炎病毒反向遗传株的方法

    公开(公告)号:CN107190022A

    公开(公告)日:2017-09-22

    申请号:CN201710507429.3

    申请日:2017-06-28

    Applicant: 浙江大学

    Abstract: 本发明公开了一种快速构建禽传染性支气管炎病毒反向遗传株的方法,属于冠状病毒反向遗传技术领域。所述构建方法包括:以BAC载体为骨架,运用体外同源重组技术,快速完成包含禽传染性支气管炎病毒基因组全长cDNA克隆的构建,将构建的重组质粒直接转染细胞,在细胞内转录获得具有感染性的转录本,并完成病毒包装,将细胞与培养基的混合液接种SPF鸡胚并传代,获得禽传染性支气管炎病毒反向遗传株。该构建方法操作简单,阳性克隆率高,而且获得的反向遗传株具有传代稳定性,为体外研究病毒的致病机理、开发新型疫苗等提供了有效的工具;本发明利用5’添加的CMV启动子,在细胞内进行转录,利用3’添加的HDVR序列,大大提高了病毒的拯救效率。

    鸡传染性支气管炎病毒nsp5ELISA抗体检测试剂盒及其应用

    公开(公告)号:CN105785049A

    公开(公告)日:2016-07-20

    申请号:CN201610239101.3

    申请日:2016-04-16

    Applicant: 浙江大学

    CPC classification number: G01N33/68

    Abstract: 本发明涉及免疫学检测方法领域,旨在提供一种鸡传染性支气管炎病毒nsp5 ELISA抗体检测试剂盒及其应用。该试剂盒包括:由重组表达的IBV非结构蛋白5包被的96孔酶联反应板、用样品稀释液稀释的IgG酶标抗体溶液、封闭液、洗涤液、样品稀释液、阳性对照样品、阴性对照样品、显色液和终止液。本发明以非结构蛋白nsp5作为包被抗原,可提供具有与进口商品化试剂盒高符合率的特性,而且成本大大降低。这是业内首次用IBV非结构蛋白作为抗原组装的ELISA抗体检测试剂盒。本试剂盒的使用具有方便快捷、敏感性高、特异性强等优点,为临床上IBV大规模抗体监测、流行病学调查以及IB的防控提供了一种新的有效的检测手段。

    H5亚型水禽流感病毒血凝素抗体间接ELISA检测试剂盒

    公开(公告)号:CN100451654C

    公开(公告)日:2009-01-14

    申请号:CN200510049765.5

    申请日:2005-05-09

    Applicant: 浙江大学

    Abstract: 本发明公开了一种H5亚型水禽流感病毒血凝素抗体间接ELISA检测试剂盒。试剂盒内设有抗体检测板,酶结合物工作液,阳性对照,阴性对照,样品稀释液,10×浓缩洗涤液,显色液A,显色液B和终止液,该试剂盒的检测板为包被水禽流感H5亚型血凝素蛋白(HA)的可拆96孔酶标板,酶结合物工作液为HRP标记兔抗水禽IgG多克隆抗体,阳性对照为H5亚型水禽流感标准阳性血清,阴性对照为水禽标准阴性血清。本发明有益的积极效果是:检测试剂盒对水禽的特异性强、敏感性高、操作简单,易于大范围推广应用,具有广阔的市场前景。

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