一种猪丁型冠状病毒感染性cDNA克隆及构建方法和应用

    公开(公告)号:CN118581115A

    公开(公告)日:2024-09-03

    申请号:CN202410830921.4

    申请日:2024-06-25

    申请人: 浙江大学

    摘要: 本发明提供了一种猪丁型冠状病毒感染性cDNA克隆及构建方法和应用,属于生物技术领域。本发明提供了一种猪丁型冠状病毒感染性cDNA克隆的构建方法,将猪丁型冠状病毒的基因组划分为若干个片段,基于酵母同源重组的一步法完成克隆构建,具有高效、快速、稳定等特点。本发明所述感染性cDNA克隆具有良好的稳定性,可直接利用CRISPR/Cas9基因编辑在基因水平上改造猪丁型冠状病毒基因组。本发明提供的感染性cDNA克隆可直接通过转染哺乳动物细胞拯救重组病毒,简化了病毒拯救操作流程。本发明还提供了可表达HiBiT标签蛋白的猪丁型冠状病毒感染性克隆的构建方法,为深入研究猪丁型冠状病毒感染机制提供了良好的技术手段。

    一种非洲猪瘟病毒基因II型和非II型的快速鉴别方法及其应用

    公开(公告)号:CN114645099A

    公开(公告)日:2022-06-21

    申请号:CN202210140250.X

    申请日:2022-02-16

    申请人: 浙江大学

    IPC分类号: C12Q1/70 C12Q1/6851 C12N15/11

    摘要: 一种非洲猪瘟病毒基因II型和非II型的快速鉴别方法及其应用,本发明对B646L基因的特异性差异位点1500位核苷酸进行检测,非洲猪瘟病毒基因II型为C,基因非II型为T。通过设计病毒不同基因型差异位点的特异性引物来有效区分非洲猪瘟病毒基因II型和非II型。筛选得到的引物对非洲猪瘟病毒基因II型的扩增效率高,对非洲猪瘟病毒基因非II型扩增效率低,不需通过测序即可判断非洲猪瘟病毒基因型为II型或非II型,检测速度快,成本低。

    猪圆环病毒2型抗原亚型鉴定试纸卡

    公开(公告)号:CN101413950B

    公开(公告)日:2013-04-10

    申请号:CN200810162444.X

    申请日:2008-11-13

    申请人: 浙江大学

    IPC分类号: G01N33/577 G01N33/558

    摘要: PCV2抗原亚型鉴定试纸卡适用于猪PCV2亚型鉴定。其反应试剂载体吸附层包括纤维层,金标纤维层,纤维素膜层和吸水材料层;金标纤维层为吸附胶体金标记的识别PCV共同抗原表位的抗衣壳蛋白单克隆抗体的金标玻璃棉,纤维素膜层上印制检测印迹T1、T2、T3和对照印迹C;检测印迹T1为识别1767PCV2亚型特异性抗原表位的抗衣壳蛋白单克隆抗体溶液印制的印迹,检测印迹T2为识别1766PCV2和1767PCV2共同抗原表位的抗衣壳蛋白单克隆抗体溶液印制的印迹,检测印迹T3为识别PCV2共同抗原表位的抗衣壳蛋白单克隆抗体溶液印制的印迹,对照印迹C为抗小鼠IgG多克隆抗体溶液印制的印迹。试纸卡特异性强,敏感性高,检测结果直观,易于推广应用。

    猪圆环病毒PCV2亚型鉴定试纸卡

    公开(公告)号:CN101413949A

    公开(公告)日:2009-04-22

    申请号:CN200810162443.5

    申请日:2008-11-13

    申请人: 浙江大学

    IPC分类号: G01N33/577 G01N33/558

    摘要: PCV2亚型鉴定检测试纸卡是适用于猪PCV2亚型鉴定的试纸卡。其反应试剂载体吸附层固定在支撑层上,吸附层包括纤维层,金标纤维层,纤维素膜层和吸水材料层;金标纤维层为吸附胶体金标记的识别PCV1和PCV2共同抗原表位的抗衣壳蛋白单克隆抗体的金标玻璃棉,纤维素膜层为印制检测印迹T1、T2和对照印迹C的硝酸纤维素膜;T1为识别1767PCV2亚型特异性抗原表位的抗衣壳蛋白单克隆抗体溶液印制的1767亚型检测印迹,T2为识别1766PCV2和1767PCV2共同抗原表位的抗衣壳蛋白单克隆抗体溶液印制的1766和1767亚型检测印迹,对照印迹C为抗小鼠IgG多克隆抗体溶液印制的印迹。试纸卡特异性强,敏感性高,检测结果直观,易于推广应用。

    一种环形RNA高效表达载体及其应用

    公开(公告)号:CN116694666A

    公开(公告)日:2023-09-05

    申请号:CN202310830730.3

    申请日:2023-07-07

    申请人: 浙江大学

    摘要: 本发明公开了一种环形RNA高效表达载体,其具有如SEQ ID NO.1所述的核苷酸序列,包括长度为92bp的上游骨架序列、长度为75bp的下游骨架序列和位于二者间用于插入待环化基因的酶切位点EcoRI,表达框架全长仅为173bp,本发明构建的环形RNA表达载体能够使外源插入序列高效地表达环形RNA,为环形RNA的获得提供了一种高效表达工具,在保证circRNA高效环化的前提下,对其成环所需的上下游侧翼序列的长度进行了高度优化,进一步降低侧翼序列带来的剪接副产物复杂度。

    鸡传染性支气管炎病毒nsp5ELISA抗体检测试剂盒及其应用

    公开(公告)号:CN105785049A

    公开(公告)日:2016-07-20

    申请号:CN201610239101.3

    申请日:2016-04-16

    申请人: 浙江大学

    IPC分类号: G01N33/68

    CPC分类号: G01N33/68

    摘要: 本发明涉及免疫学检测方法领域,旨在提供一种鸡传染性支气管炎病毒nsp5 ELISA抗体检测试剂盒及其应用。该试剂盒包括:由重组表达的IBV非结构蛋白5包被的96孔酶联反应板、用样品稀释液稀释的IgG酶标抗体溶液、封闭液、洗涤液、样品稀释液、阳性对照样品、阴性对照样品、显色液和终止液。本发明以非结构蛋白nsp5作为包被抗原,可提供具有与进口商品化试剂盒高符合率的特性,而且成本大大降低。这是业内首次用IBV非结构蛋白作为抗原组装的ELISA抗体检测试剂盒。本试剂盒的使用具有方便快捷、敏感性高、特异性强等优点,为临床上IBV大规模抗体监测、流行病学调查以及IB的防控提供了一种新的有效的检测手段。