树干毕赤酵母大片段DNA基因组文库的构建方法及其应用

    公开(公告)号:CN103088434B

    公开(公告)日:2014-06-04

    申请号:CN201210484156.2

    申请日:2012-11-23

    申请人: 江南大学

    摘要: 本发明提供一种树干毕赤酵母大片段DNA基因组文库的构建方法,包括如下步骤:(1)提取保藏号为ATCC?NO:58376的树干毕赤酵母基因组DNA;(2)重组载体的构建;(3)阳性克隆的筛选;(4)阳性克隆的酶切鉴定及文库的保存。本发明首次成功构建了树干毕赤酵母大片段DNA基因组文库,文库库容量大(克隆概率97%),覆盖率高(N=1.08),运用该基因组文库成功筛选到了纤维二糖酶相关基因,为未知功能目的基因的筛选、相关基因的功能性研究以及进一步基因水平上的改造以获得理想工业化生产菌株奠定了基础。

    一株重组大肠杆菌及用其制备磷脂酶A1的方法

    公开(公告)号:CN103045526A

    公开(公告)日:2013-04-17

    申请号:CN201210551871.3

    申请日:2012-12-18

    申请人: 江南大学

    摘要: 本发明提供一株重组大肠杆菌及用其制备磷脂酶A1的方法。本发明成功构建了一株磷脂酶A1基因来源于杨氏柠檬酸杆菌CICC No.21596的基因重组大肠杆菌BL21(DE3)/pET-phla CCTCC No:M2012424,用该菌株进行液体发酵来制备溶血性磷脂酶A1,其制备方法包括斜面培养、种子培养、液体发酵培养以及粗酶液的提取。利用本发明菌株通过液体发酵制备磷脂酶A1,具有产酶量和酶活性高、生产工艺简单、生产周期短、成本低、易于工艺放大等优点,为磷脂酶A1的规模化生产奠定了基础。

    一株具有解磷解钾功能的产纤维素酶地衣芽孢杆菌及其应用

    公开(公告)号:CN103045511A

    公开(公告)日:2013-04-17

    申请号:CN201210552130.7

    申请日:2012-12-18

    申请人: 江南大学

    CPC分类号: Y02A40/213

    摘要: 本发明涉及一株具有解磷解钾功能的产纤维素酶地衣芽孢杆菌及其应用。本发明公开了一株保藏号为CCTCC No.M 2012457的地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)BL-1,该菌株可产纤维素酶且兼具良好的解磷解钾能力,将该菌株与酵母菌、枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、胶质芽孢杆菌、圆褐固氮菌进行科学复配后可制成复合微生态制剂,将按比例添加该复合微生态制剂的微生物活性污泥有机肥料直接或经堆肥发酵后施用于作物生长区域,具有明显的肥田增产效应。本发明实现了燃料乙醇生产企业废弃活性污泥的高效资源化综合利用,同时杜绝了环境污染,处理工艺简单,应用成本低,有利于生态保护和农业的可持续发展。

    一株兼具硝化功能的反硝化菌株及包含该菌株的多种活性微生物的水体改良剂及制备方法

    公开(公告)号:CN102492642B

    公开(公告)日:2013-04-17

    申请号:CN201110428358.0

    申请日:2011-12-20

    申请人: 江南大学

    IPC分类号: C12N1/20 C02F3/34 C12R1/125

    摘要: 一株兼具硝化功能的反硝化菌株及包含该菌株的多种活性微生物的水体改良剂及制备方法,属于水产养殖和水体改良技术领域。本发明菌株保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号CCTCC NO:M2011443,以该菌为基础的包含枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、沼泽红假单胞菌、球形节杆菌、深红酵母、植物乳杆菌等多种菌株的活性微生物水体改良剂。该菌经液体发酵得到活菌数50-300亿cfu/mL的发酵液,进一步制备得2000-20000亿cfu/g的菌粉。再配以稀释剂,制备得到液体或粉末状的水体改良剂,其有效活菌数达10-300亿cfu/mL或cfu/g。本发明在养殖水体中有降低氨氮、亚硝酸盐、硝酸盐含量的作用,适合在不同的养殖水体中起到改善水质的作用。

    一株解淀粉芽孢杆菌及用该菌株发酵生产凝乳酶的方法

    公开(公告)号:CN102191203B

    公开(公告)日:2012-09-05

    申请号:CN201110091892.7

    申请日:2011-04-13

    申请人: 江南大学

    IPC分类号: C12N1/20 C12N9/54 C12R1/07

    摘要: 一株解淀粉芽孢杆菌及用该菌株发酵生产凝乳酶的方法,属于微生物发酵技术领域。本发明公开了一株产凝乳酶的菌株,命名为解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefacines)JNU002,已在中国典型培养物保藏中心保藏,保藏编号为CCTCCNO:M2011045。应用该菌株通过液体发酵生产凝乳酶,步骤为(1)斜面培养;(2)种子培养;(3)液体发酵培养:将培养好的种子接入发酵培养基中,接种量为0.1%~0.2%,在32~36℃培养60~72h。本发明的有益效果:利用解淀粉芽孢杆菌CCTCCNO:M2011045液体发酵生产凝乳酶具有产酶水平高,发酵时间短,易于控制生长条件等诸多优点,完全适合工业化生产的应用。

    一株草木樨中华根瘤菌及应用其发酵产锰过氧化物酶的方法

    公开(公告)号:CN102417890A

    公开(公告)日:2012-04-18

    申请号:CN201110407709.X

    申请日:2011-12-09

    申请人: 江南大学

    摘要: 一株草木樨中华根瘤菌及其应用,属于微生物发酵技术领域。草木樨中华根瘤菌(Sinorhizobium meliloti)J09,已在中国典型培养物保藏中心保藏,保藏编号为CCTCC NO:M2011318。应用该菌株通过液体发酵生产锰过氧化物酶,步骤为(1)斜面培养;(2)种子培养;(3)液体发酵培养:将培养好的种子接入发酵培养基中,接种量为1%~2%,在32~36℃培养96~136h,摇床转速150rpm。本发明的优点在于:CCTCC NO:M2011318具有产锰过氧化物酶的能力,还具有较高的生物固氮活性。利用该菌液体发酵产锰过氧化物酶具有生产周期短,生产成本低,易于控制生长条件等诸多优点,具有工业化生产的潜力。同时,高效的生物固氮活性也说明该菌株具有培肥土壤,促进农作物高产的能力。

    一株耐酸酵母及其代谢工程构建产L-乳酸重组菌的方法

    公开(公告)号:CN102199553A

    公开(公告)日:2011-09-28

    申请号:CN201110116783.6

    申请日:2011-05-06

    申请人: 江南大学

    摘要: 一株耐酸酵母及其代谢工程构建产L-乳酸重组菌的方法,属于基因工程技术领域。本发明筛选分离得到一株能在pH2.5条件下生长且不利用乳酸的酵母,鉴定为木兰假丝酵母C4(CandidamagnoliaeC4),在中国典型培养物保藏中心保藏,保藏编号为CCTCCNO:M2010362;将来源于米根霉As3.819的乳酸脱氢酶编码基因(ldhA)插入含有G418抗性基因的酵母穿梭载体,构建了重组质粒pYX212-kanMX-ldhA;电转化入木兰假丝酵母C4中,得到一株具有产L-乳酸能力的重组菌株木兰假丝酵母C42,其产乳酸量达到42g/L。本发明所构建的木兰假丝酵母C42具有耐乳酸的明显优势,在生产中可以大幅度降低中和剂CaCO3的用量,减少环境污染。

    一株枯草芽孢杆菌及用该菌株发酵生产凝乳酶的方法

    公开(公告)号:CN101993846A

    公开(公告)日:2011-03-30

    申请号:CN201010504167.3

    申请日:2010-10-12

    申请人: 江南大学

    IPC分类号: C12N1/20 C12N9/56 C12R1/125

    摘要: 一株枯草芽孢杆菌及用该菌株发酵生产凝乳酶的方法,属于微生物发酵技术领域。本发明公开了一株产凝乳酶的菌株,命名为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)T,已在中国典型培养物保藏中心保藏,保藏编号为CCTCCNO:M2010259。应用该菌株通过液体发酵生产凝乳酶,步骤为(1)斜面培养;(2)种子培养;(3)液体发酵培养:将培养好的种子接入发酵培养基中,接种量为0.1%~0.2%,在32~36℃培养96~136h,摇床转速150rpm。本发明的优点在于:枯草芽孢杆菌是常见的非致病菌,适合凝乳酶的生产;利用枯草芽孢杆菌CCTCCNO:M2010259液体发酵生产凝乳酶具有产酶水平高,生产周期短,生产成本低,易于控制生长条件,酶提取方便等诸多优点,完全具有工业化生产的潜力。