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公开(公告)号：CN104673733B
公开(公告)日：2018-02-13
申请号：CN201510067574.5
申请日：2015-02-10
申请人： 浙江大学
摘要： 本发明公开了一种工程菌及其在制备(R)‑6‑氰基‑5‑羟基‑3‑羰基己酸叔丁酯中的应用，该工程菌包括宿主细胞和转入宿主细胞的目的基因，所述目的基因为碱基序列如SEQ ID N 0.3所示的卤代醇脱卤酶基因。本发明将SEQ ID N 0.3所示的卤代醇脱卤酶基因导入宿主细胞构建的工程菌可表达卤代醇脱卤酶HHDH，通过该酶的催化作用可实现将(S)‑6‑氯‑5‑羟基‑3‑羰基己酸叔丁酯催化成(R)‑6‑氰基‑5‑羟基‑3‑羰基己酸叔丁酯。该反应条件温和，操作简便，提高了产物的转化率和纯度。
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公开(公告)号：CN104651290B
公开(公告)日：2018-01-02
申请号：CN201510066577.7
申请日：2015-02-10
申请人： 浙江大学
摘要： 本发明公开了一种工程菌及其在制备阿托伐他汀药物中间体中应用，该工程菌包括宿主细胞和转入宿主细胞的目的基因，所述目的基因为碱基序列如SEQ ID N 0.3所示的卤代醇脱卤酶基因。本发明将SEQ ID N 0.3所示的卤代醇脱卤酶基因导入宿主细胞构建的工程菌可表达卤代醇脱卤酶HheA，通过该酶的催化作用可实现将(S)‑6‑氯‑5‑羟基‑3‑羰基己酸叔丁酯催化成(R)‑6‑氰基‑5‑羟基‑3‑羰基己酸叔丁酯和(3R，5S)‑6‑氯‑3，5‑二羟基己酸叔丁酯催化成(3R，5R)‑6‑氰基‑3，5‑二羟基己酸叔丁酯。该反应条件温和，操作简便，提高了产物的转化率和纯度。
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公开(公告)号：CN104560912B
公开(公告)日：2017-09-08
申请号：CN201510005882.5
申请日：2015-01-06
申请人： 浙江大学
摘要： 本发明公开了一种酯酶及其编码基因和应用，该酯酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明从假单胞菌Pseudomonas CGMCC NO.4184中克隆得到酯酶基因，该基因表达后获得的酯酶具有高表达量、高选择性和手性选择性的特点；本发明将包含酯酶基因的工程菌应用到催化rac‑2‑羧乙基‑3‑氰基‑5‑甲基己酸乙酯水解制备2‑羧乙基‑(S)‑3‑氰基‑5‑甲基己酸乙酯中，能够控制反应的转化率在超过50％时，即可获得未被水解的高纯度2‑羧乙基‑(S)‑3‑氰基‑5‑甲基己酸乙酯。
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公开(公告)号：CN104592037B
公开(公告)日：2016-08-24
申请号：CN201510008827.1
申请日：2015-01-08
申请人： 浙江大学
IPC分类号： C07C211/30 , C07C209/00
摘要： 本发明公开了一种西那卡塞的合成方法，该合成路线分为两个部分：(1)以消旋1?萘基乙胺为起始原料，采用动态动力学拆分的方法，以Pd/LDH?SA为消旋化催化剂、对氯苯酚脂肪酸酯为酰基供体、脂肪酶为生物拆分催化剂获得手性的；(2)以间三氟甲基苯甲醛为起始原料，与便宜易得的原料乙醛反应得到间三氟甲基肉桂醛，减压蒸馏后得到纯品；间三氟甲基肉桂醛与反应，生成亚胺中间体；亚胺中间体溶解到乙醇中，以雷尼镍为加氢催化剂，反应后得到产品西那卡塞。该合成方法提高了反应收率和产品的光学纯度，反应条件更温和，而且原料易得。
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公开(公告)号：CN104087546B
公开(公告)日：2016-07-06
申请号：CN201410314267.8
申请日：2014-07-03
申请人： 浙江大学
摘要： 本发明公开了一种工程菌及制备(3R，5S)6-氯-3，5-二羟基己酸叔丁酯的方法，该工程菌包含醇脱氢酶基因、葡萄糖脱氢酶基因、羰基还原酶基因；该方法包括培养工程菌并诱导酶类表达，离心取细胞，用缓冲液重悬，获得静息细胞悬液；往静息细胞悬液中添加6-氯-3，5-二羰基己酸叔丁酯、葡萄糖和异丙醇进行反应，反应完成后，从反应液中分离纯化得到(3R，5S)6-氯-3，5-二羟基己酸叔丁酯。本发明实现从6-氯-3，5-二羰基己酸叔丁酯到(3R，5S)6-氯-3，5-二羟基己酸叔丁酯的一步化生产，简化了(3R，5S)6-氯-3，5-二羟基己酸叔丁酯的工艺，避免了额外辅酶的添加，降低了生产成本。
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公开(公告)号：CN102517276A
公开(公告)日：2012-06-27
申请号：CN201110417666.3
申请日：2011-12-14
申请人： 浙江大学
IPC分类号： C12N11/14
摘要： 本发明公开了一种高底物耐受性的磁性纳米载体固定化醛缩酶的制备方法，包括如下步骤：1) 以二价和三价铁盐的混合物共沉淀制备超顺磁性Fe3O4纳米粒子，以硅烷偶联剂进行修饰，并在修饰后的微粒外表以戊二醛活化，从而得到表面活化的磁性纳米粒子；2)将纯化脱盐后的醛缩酶缓冲液和磁性载体在低温下搅拌、洗涤、冷冻干燥后得到磁性纳米载体固定化醛缩酶；3)采用该磁性纳米载体固定化醛缩酶为催化剂催化2-脱氧-D-核糖-5-磷酸，得到3-磷酸甘油醛和乙醛．本发明所涉及的固定化醛缩酶在催化2-脱氧-D-核糖-5-磷酸反应中，底物乙醛耐受性显著提高，酶的回收利用操作极大简化。
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公开(公告)号：CN101480582B
公开(公告)日：2012-06-13
申请号：CN200810163821.1
申请日：2008-12-25
申请人： 浙江大学
IPC分类号： B01D71/56
摘要： 本发明涉及一种基于端羟基聚丁二烯聚氨酯膜的制备方法。目前应用于渗透汽化膜分离丙酮/丁醇的高分子膜或成本昂贵或容易污染发酵液。本发明首先将端羟基聚丁二烯与甲苯-2，4-二异氰酸酯混合溶于四氢呋喃溶剂中，并加入催化剂二月桂酸二丁基锡，合成预聚体；然后将二苯基甲烷二胺加入到预聚体中，得到的基于端羟基聚丁二烯聚氨酯铸膜液；再将基于端羟基聚丁二烯聚氨酯铸膜液浇铸在洁净的玻璃板上，用平整的刮膜刀刮膜，在常温下自然晾干，然后放入真空烘箱内真空干燥，得到基于端羟基聚丁二烯聚氨酯膜。本发明方法步骤简单、生产成本低，具有很好的工业应用前景。
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公开(公告)号：CN102304552A
公开(公告)日：2012-01-04
申请号：CN201110279572.4
申请日：2011-09-20
申请人： 浙江大学
CPC分类号： Y02P20/588
摘要： 本发明公开了一种磁性多孔聚合物固定化脂肪酶制备1,3-甘油二酯的方法，包括如下步骤：1)以二价和三价铁盐的混合物共沉淀制备超顺磁性Fe3O4内核，以表面活性剂包覆，并在微粒外表进行悬浮聚合制备多孔聚合物壳层，从而得到磁性多孔聚合物微球载体；2)加入脂肪酶酶溶液，搅拌、洗涤、干燥得到固定化酶；3)采用该固定化酶催化甘油与脂肪酸的酯化反应，得到1,3-甘油二酯。本发明所涉及的固定化脂肪酶在1,3-甘油二酯的合成反应中，活力、操作稳定、区域选择性均显著提高，酶的回收利用操作极大简化，产品纯度高且不含有害溶剂。
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公开(公告)号：CN101671639B
公开(公告)日：2011-05-25
申请号：CN200910102115.0
申请日：2009-08-13
申请人： 浙江大学
摘要： 本发明公开了一种苏云金芽孢杆菌及其L-薄荷醇制备方法。苏云金芽孢杆菌保藏号为CGMCC No.3189。方法步骤：1)从斜面接种苏云金芽孢杆菌于摇瓶培养种子液；2)将种子液接入1～2L发酵培养基培养；3)将发酵培养后得到的培养液体离心除去菌体得到含有胞外脂肪酶的发酵上清液，用盐酸或氢氧化钠溶液调节pH值；4)在发酵上清液中加入八异构体外消旋薄荷醇酯进行不对称水解反应，得到L-薄荷醇及未水解的薄荷醇酯；5)用正己烷萃取，得到混合物采用柱状色谱分离，分离，得到L-薄荷醇。提出苏云金芽孢杆菌，并且该菌能分泌的高效的脂肪酶。能够高效选择性的催化水解八异构体外消旋乙酸薄荷醇酯或八异构体外消旋丙酸薄荷醇酯混合物，得到高纯度的L-薄荷醇。
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公开(公告)号：CN1268755C
公开(公告)日：2006-08-09
申请号：CN200410066720.4
申请日：2004-09-24
申请人： 浙江大学
摘要： 本发明公开了一种酶催化醇解反应拆分制备光学活性氰醇的方法。它是将0.001～0.05molα-氰基苄醇脂肪酸酯或α-氰基-2-氯苄醇脂肪酸酯或α-氰基-3-氯苄醇脂肪酸酯或α-氰基-4-氯苄醇脂肪酸酯，0.002～0.2mol脂肪醇和50～500ml含有0%～1%水的有机反应溶剂加入到反应器中，然后加入25～1500mg脂肪酶，在0℃～70℃反应温度下，搅拌反应1～80小时，获得S-α-氰基苄醇或S-α-氰基-2-氯苄醇或S-α-氰基-3-氯苄醇或S-α-氰基-4-氯苄醇。本发明反应选择性好，转化率高，获得的产物S-氰醇光学纯度高，反应适用温度范围宽，可在常温下进行，操作方便，设备简单。本发明在有机溶剂中实现，酶活力稳定，不流失，可反复循环使用；可防止S-氰醇的分解，提高S-氰醇的稳定性和光学纯度，因而具有较大的工业应用前景。
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