公开(公告)号：CN115128268A

公开(公告)日：2022-09-30

申请号：CN202210404918.7

申请日：2022-04-18

Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)

Inventor： 胡哲 ,  郭奎 ,  王晓钧 ,  郭巍 ,  刘荻萩

IPC: G01N33/569 ,  G01N33/58 ,  G01N33/68 ,  G01N33/543

Abstract: 本发明公开了一种马流产沙门氏菌病4种致病病原菌通用型间接ELISA抗体检测试剂盒及其应用。所述的试剂盒中含有截短表达的沙门氏菌外膜重组蛋白OmpA包被的酶标板，所述的截短表达的沙门氏菌外膜重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。本发明利用Pull down技术成功筛选到了马流产沙门氏菌病4种病原的共同优势抗原，并将其克隆到表达载体通过截短分段表达实现了对该OmpA蛋白的可溶性表达，同时建立了马流产沙门氏菌病4种致病病原菌通用型间接ELISA抗体检测试剂盒以及相应的iELISA抗体诊断方法，实验证明，使用该试剂盒建立的方法具有特异性强、敏感性高的优点，将成为马流产沙门菌病抗体检测的一种有效工具，也为未来疫苗研发的抗体监测奠定了方法学基础。

公开(公告)号：CN111088379A

公开(公告)日：2020-05-01

申请号：CN202010046938.2

申请日：2020-01-16

Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心)

Inventor： 胡哲 ,  王晓钧

IPC: C12Q1/689 ,  C12Q1/686 ,  C12Q1/04 ,  C12N15/11 ,  C12R1/42

Abstract: 本发明公开了一种用于检测马流产沙门氏菌的特异性引物组及其用途。所述的引物组由上游引物以及下游引物组成，其中所述的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述的下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。特异性实验结果表明该引物组只与马流产沙门氏菌反应，而与其他马、驴常见传染病病原均无交叉反应，具有良好的特异性。灵敏度实验表明，该引物组检测马流产沙门氏菌的最低限度为4.7×103CFU/ml，具有良好的敏感性。本发明的提出为马流产沙门氏菌的检测或诊断提供了一种有效技术手段，通过本发明的方法，使马流产沙门氏菌的检出率极大提高，诊断更精确，对于马流产沙门氏菌病的防控具有重要意义。

公开(公告)号：CN105861555B

公开(公告)日：2019-05-14

申请号：CN201610309169.4

申请日：2016-05-11

Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所

Inventor： 王晓钧 ,  张翔 ,  郭巍 ,  张振宇 ,  胡哲

IPC: C12N15/85 ,  C12N7/01

Abstract: 本发明公开了一种双向转录/表达质粒及其在流感病毒反向遗传学中的应用。本发明的一种双向转录/表达质粒是以真核表达载体pEF4/myc‑His B为骨架进行改造得到的。为了建立马流感病毒(Equine influenza virus,EIV)的反向遗传操作系统，本发明使用构建得到的双向转录/表达质粒双向分别表达马流感病毒PB2、PB1、PA、HA、NP、NA、NS以及M基因，通过共转染、测序、生长曲线的绘制和酶切鉴定，成功拯救得到一株EIV及其突变体。同时与现有的pBD系统进行产毒量的比较，表明本发明建立的反向遗传操作系统优于pBD系统。本发明的提出为流感病毒的反向遗传研究提供了一种新的技术手段，同时也为日后深入研究马流感病毒的传播，致病机理，乃至疫苗候选株的筛选奠定了坚实基础。

公开(公告)号：CN105861555A

公开(公告)日：2016-08-17

申请号：CN201610309169.4

申请日：2016-05-11

Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所

Inventor： 王晓钧 ,  张翔 ,  郭巍 ,  张振宇 ,  胡哲

IPC: C12N15/85 ,  C12N7/01

CPC classification number: C12N15/85 ,  C12N7/00 ,  C12N2760/16121 ,  C12N2760/16151 ,  C12N2800/107

Abstract: 本发明公开了一种高效的双向转录/表达质粒及其在流感病毒反向遗传学中的应用。本发明的一种双向转录/表达质粒是以真核表达载体pEF4/myc?His B为骨架进行改造得到的。为了建立马流感病毒(Equine influenza virus,EIV)的反向遗传操作系统，本发明使用构建得到的双向转录/表达质粒双向分别表达马流感病毒PB2、PB1、PA、HA、NP、NA、NS以及M基因，通过共转染、测序、生长曲线的绘制和酶切鉴定，成功拯救得到一株EIV及其突变体。同时与现有的pBD系统进行产毒量的比较，表明本发明建立的反向遗传操作系统优于pBD系统。本发明的提出为流感病毒的反向遗传研究提供了一种新的技术手段，同时也为日后深入研究马流感病毒的传播，致病机理，乃至疫苗候选株的筛选奠定了坚实基础。

公开(公告)号：CN104020294B

公开(公告)日：2016-03-30

申请号：CN201410239152.7

申请日：2014-05-30

Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所

Inventor： 王晓钧 ,  胡哲 ,  林跃智 ,  周建华

IPC: G01N33/68

Abstract: 本发明公开了一种用于检测马传染性贫血病毒p26蛋白的试剂盒及其用途。本发明所述试剂盒中包含由保藏号CGMCC NO.9106以及保藏号为CGMCC NO.9107的杂交瘤细胞株分泌产生的单克隆抗体，其中任选一种单克隆抗体是用辣根过氧化物酶或异硫氰酸荧光素或生物素标记的。本发明发明人制备并筛选得到的两株杂交瘤细胞株能够识别马传染性贫血病毒p26蛋白不同抗原表位，且实验证明该两株杂交瘤细胞株分泌产生的单克隆抗体只与马传染性贫血病毒而不与其他马源病毒反应，使用本发明的方法检测马传染性贫血病毒p26蛋白抗原，其最低检测下限为98pg。本发明为马传染性贫血病毒的检测提供了一种有效的，准确性高的新的检测手段，同时为马传染性贫血病毒的防治提供了技术支撑。

公开(公告)号：CN103073629B

公开(公告)日：2014-07-09

申请号：CN201310001962.4

申请日：2013-01-04

Applicant: 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所

Inventor： 王晓钧 ,  胡哲

IPC: C07K14/47 ,  C12N15/12 ,  C12N15/63 ,  A61K38/17 ,  A61K48/00 ,  A61K38/16 ,  A61P31/14

Abstract: 本发明公开了一种可抑制逆转录病毒粒子释放的蛋白，其编码序列及在抑制病毒从细胞释放中的应用。本发明研究了该蛋白与马传染性贫血病毒（EIAV）、人免疫缺陷病毒（HIV-1）及猴免疫缺陷病毒（SIV）的相互作用关系，并确定他们相互作用的关键位点。本发明通过分子克隆技术，获得了该蛋白基因和EIAV病毒样颗粒的真核表达载体，经测序分析，克隆的该蛋白基因与该基因的预测序列的同源性为99%，相对应的氨基酸序列同源率为94.0%。该蛋白具有限制人免疫缺陷病毒1型、马传染性贫血病毒、以及猴免疫缺陷病毒病毒粒子从细胞释放的能力，进一步的研究发现，EIAV的env蛋白能够拮抗该蛋白对病毒的限制作用。

公开(公告)号：CN1301866A

公开(公告)日：2001-07-04

申请号：CN99127532.2

申请日：1999-12-30

Applicant: 卫生部艾滋病预防与控制中心 ,  中国农业科学院哈尔滨兽医研究所

Inventor： 邵一鸣 ,  沈荣显 ,  陈刚 ,  于康震 ,  潘品良 ,  贾斌 ,  范秀娟 ,  王晓钧 ,  相文华 ,  冯毅 ,  吕晓玲 ,  薛飞

IPC: C12N15/11 ,  C12N15/49 ,  C12N15/63 ,  C07K14/155 ,  A61K39/21 ,  A61K48/00 ,  G01N33/569 ,  G01N33/68 ,  A61P31/12

Abstract: 本发明涉及马传染性贫血病毒的称为辽系野毒株的一种强毒株和称为驴胎皮肤细胞适应株的一种经过多次马属动物细胞传代得到的减毒疫苗株的全长前病毒DNA序列。各功能基因的DNA序列及其编码的蛋白质序列及各功能基因及蛋白产物的应用。所述的两种毒株是我国自行分离得到的。