公开(公告)号：CN101408548A

公开(公告)日：2009-04-15

申请号：CN200810162445.4

申请日：2008-11-13

Applicant: 浙江大学

Inventor： 周继勇 ,  金玉兰 ,  颜焰 ,  商绍彬

IPC: G01N33/577 ,  G01N33/569 ,  G01N33/558

Abstract: PCV1和PCV2鉴别检测试纸卡适用于猪PCV2感染快速鉴别检测。其反应试剂载体吸附层包括纤维层，金标纤维层，纤维素膜层和吸水材料层；金标纤维层为吸附胶体金标记的识别PCV1和PCV2共同抗原表位的抗衣壳蛋白单克隆抗体的金标玻璃棉，纤维素膜层为依次印制检测印迹T1、T2和对照印迹C的硝酸纤维素膜；检测印迹T1为识别PCV1型特异性抗原表位的单克隆抗体溶液印制的条状PCV1检测印迹；T2为识别PCV1和PCV2共同抗原表位的抗衣壳蛋白单克隆抗体溶液印制的条状PCV检测印迹，对照印迹C为抗小鼠IgG多克隆抗体溶液印制的条状对照印迹。试纸卡特异性强，敏感性高，简便快速，检测结果形象直观，在生产实践中易于推广应用。

公开(公告)号：CN100384998C

公开(公告)日：2008-04-30

申请号：CN200310108622.8

申请日：2003-11-11

Applicant: 浙江大学

Inventor： 周继勇 ,  陈吉刚 ,  王金勇 ,  腾巧泱 ,  吴建祥

IPC: C12N15/26 ,  C12P21/00 ,  C07K14/55 ,  A61K39/39 ,  A61P31/00 ,  A61P31/12 ,  A61P33/00 ,  C12R1/19 ,  C12R1/645

Abstract: 本发明公开了一种重组鹅白细胞介素-2(gsIL-2)蛋白的制备方法及其用途。RT-PCR扩增的浙东白鹅白细胞介素-2的DNA片段与原核表达载体pBAD/HisB、真核表达载体pMETαB和pMETB构建表达质粒pBAD/HisB/gsIL-2、pMETαB/gsIL-2和pMETA/gsIL-2，分别转化大肠杆菌LMG194、酵母菌PMAD11和PMAD16后诱导表达。表达量分别占菌体总蛋白的9～10%、20～25%和10～12%。大肠杆菌和酵母菌PMAD16诱导后经超声波裂解、离心去沉淀即为gsIL-2蛋白粗制品，PMAD11表达的gsIL-2主要分泌于培养基中，离心取上清即为gsIL-2蛋白粗制品。用Ni-NTAArgarose蛋白纯化系统可以较快的得到gsIL-2纯品，粗制品或纯品可以作为免疫佐剂和疾病治疗药物。本发明应用基因工程技术制备的重组gsIL-2蛋白，具有工艺流程简单，生产成本低，稳定性好，生物学活性高等特点。

公开(公告)号：CN1911964A

公开(公告)日：2007-02-14

申请号：CN200610053184.3

申请日：2006-08-29

Applicant: 浙江大学

Inventor： 周继勇 ,  王金勇 ,  方杰

IPC: C07K16/18 ,  C12N15/09 ,  C12N1/21 ,  C12N5/18

Abstract: 鸭白介素－2受体α链(duCD25)胞外区蛋白单克隆抗体及其制备方法，根据公布的鸡白介素－2受体α链cDNA，同源克隆duCD25cDNA，并对其编码胞外区蛋白的核苷酸片段扩增，扩增产物连接载体构建重组表达质粒，转化大肠杆菌BL21(DE3)，诱导转化细菌表达duCD25胞外区蛋白，纯化的重组duCD25胞外区包涵体蛋白免疫小鼠后取其脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞融合，选择性培养后，用间接ELISA筛选杂交瘤细胞培养上清，以有限稀释法进行克隆化，获得稳定分泌抗duCD25胞外区蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株；选择分泌抗真核表达duCD25蛋白抗体的单克隆细胞株，扩大培养后腹腔注射经降殖烷致敏的BALB/c雌鼠，获得抗duCD25单克隆抗体腹水。

公开(公告)号：CN1224704C

公开(公告)日：2005-10-26

申请号：CN03150527.9

申请日：2003-08-20

Applicant: 浙江大学

Inventor： 周继勇 ,  陈吉刚 ,  王金勇 ,  吴建祥

IPC: C12N15/09 ,  C12N15/12 ,  C12N15/63 ,  C12P21/00 ,  A61K39/39 ,  A61P37/04 ,  A61P31/12 ,  A61P31/04 ,  A61P33/00

Abstract: 本发明公开了一种重组chBJSTWO蛋白的制备方法。RT-PCR扩增的不同品系鸡BJSTWO的cDNA片段与原核表达载体pBAD/His B、真核表达载体pMETαA和真核表达载体pMETA构建表达质粒pBAD/His B/chBJSTWO、pMETαA/chBJSTWO和pMETA/chBJSTWO，分别转化大肠杆菌LMG194、酵母菌株PMAD11和PMAD16后诱导表达。大肠杆菌和酵母菌PMAD16诱导后经超声波裂解、离心去沉淀即可得到chBJSTWO粗制品，PMAD11表达的chBJSTWO主要以分泌形式存在于培养基中，经过离心取上清即可得到chBJSTWO粗制品。用Ni-NTA Argarose蛋白纯化系统可以较快的得到chBJSTWO纯品，粗制品或纯品可以作为免疫佐剂、抗病添加剂和疾病治疗药物。本发明具有工艺流程简单，生产成本低，稳定性好，生物学活性高等特点。

公开(公告)号：CN1579553A

公开(公告)日：2005-02-16

申请号：CN200410018528.8

申请日：2004-05-18

Applicant: 浙江大学

Inventor： 周继勇 ,  申会刚 ,  郭军庆

IPC: A61K48/00 ,  A61K39/12 ,  A61P31/12

Abstract: 本发明公开了一种II型猪圆环病毒核酸疫苗的制备方法及其应用。制备方法为：1)设计特异性引物，以PCV2杭州株(HZ0201)的基因组为模板，通过PCR的方法克隆PCV－2的ORF1、ORF2、ORF3和ORF4基因，与pCI－neo构建为真核表达载体；2)分离猪外周血单个核细胞，通过RT－PCR方法克隆猪IFN、IL－2和IL－4基因，并与pCI－neo构建为真核表达载体；3)以上述重组载体为基础，分别构建PCV2 ORF2与PCV2的其它基因或与猪细胞因子基因的融合表达载体；本发明的优点：(1)不需培养病毒，生产周期短；(2)不需细胞培养，有效防止其它猪源病毒的污染；(3)不表达对机体有害的致病蛋白，安全性高；(4)可同时激活体液免疫与细胞免疫应答。

公开(公告)号：CN118957149B

公开(公告)日：2025-05-16

申请号：CN202411044675.6

申请日：2024-07-31

Applicant: 浙江大学

Inventor： 金玉兰 ,  季暄 ,  董伟仁 ,  颜焰 ,  周继勇

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/6851 ,  C12N15/11 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明提供了猪伪狂犬病毒基因分型探针引物组及分型试剂盒和分型方法，属于基因检测技术领域。本发明提供了一套猪伪狂犬病毒基因分型探针引物组，包括一对通用引物和基因分型TaqMan探针。本发明所述基因分型探针引物组在稀释度(101copies/μL～106copies/μL)范围内线性关系良好，最低检测限度均为101copies/μL，具有良好的灵敏性；与其他病毒不存在交叉反应，特异性良好；组内和组间各稀释度的变异系数均小于3％，重复性良好，因此，本发明所述基因分型探针引物组能够稳定地鉴定PRV基因型。

公开(公告)号：CN119804861A

公开(公告)日：2025-04-11

申请号：CN202411976550.7

申请日：2024-12-30

Applicant: 浙江大学

Inventor： 郑肖娟 ,  朱文青 ,  徐丽华 ,  金子安 ,  周继勇 ,  颜艳

IPC: G01N33/569 ,  G01N33/558 ,  G01N33/533 ,  G01N33/535

Abstract: 本发明提供一种基于非洲猪瘟病毒D250R蛋白的间接ELISA抗体检测方法，涉及病毒检测技术领域。本发明将D250R蛋白基因克隆至原核表达载体pET‑32a(+)中构建重组质粒pET‑32a‑D250R，经IPTG诱导D250R重组蛋白并将该重组蛋白纯化包被酶标板，优化确定间接ELISA最适条件。本发明以D250R蛋白为基础，以待检血清为样品，建立的间接ELISA抗体检测方法灵敏度高、特异性强、与商品化试剂盒符合率高，为ASF的诊断技术开发及防控提供参考。

公开(公告)号：CN118109472A

公开(公告)日：2024-05-31

申请号：CN202410425230.6

申请日：2024-04-10

Applicant: 浙江大学

Inventor： 周继勇 ,  杜柳阳 ,  顾金燕 ,  颜焰 ,  金玉兰 ,  董伟仁

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/79 ,  C12N15/66

Abstract: 本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种可翻译蛋白的环形RNA表达载体及构建方法和表达方法。本发明提供了一种环形RNA过表达骨架，包括以下依次连接的结构：上游同源臂序列、上游促环化序列、第一酶切位点、间隔序列、IRES序列、第二酶切位点、下游促环化序列和下游同源臂序列。本发明所述环形RNA过表达骨架可以使表达的环形RNA具备蛋白翻译能力，将需要环化的基因线性序列通过酶切位点重组至装载有表达骨架的真核表达载体中，然后将重组质粒转染至细胞即可使表达的目标环形RNA分子翻译蛋白。本发明构建的环形RNA过表达骨架及表达载体提供了一种表达具有蛋白翻译功能环形RNA的工具。

公开(公告)号：CN116855641A

公开(公告)日：2023-10-10

申请号：CN202311027744.8

申请日：2023-08-15

Applicant: 浙江大学

Inventor： 廖敏 ,  田野 ,  王军 ,  马利青 ,  周继勇 ,  颜焰 ,  董伟仁

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/686 ,  C12N15/11 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明公开了一种用于制备检测丁型冠状病毒试剂盒的引物对及其应用，属于生物技术领域。所述引物对包括上游引物和下游引物，上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明提供的引物对能特异地扩增出样品中的丁型冠状病毒的ORF1ab基因片段，检测灵敏度高，最低检测限达6.19×10‑6ng/μL，结果准确，可将其应用到对丁型冠状病毒的检测和鉴定当中。该引物对对丁型冠状病毒的不同毒株的检测具有通用性，可应用于鸟类粪便样品中丁型冠状病毒核酸的检测。本发明为今后对该病的流行检测和防控提供检测工具。

公开(公告)号：CN116854783A

公开(公告)日：2023-10-10

申请号：CN202311017830.0

申请日：2023-08-14

Applicant: 浙江大学

Inventor： 颜焰 ,  董伟仁 ,  周继勇 ,  顾金燕 ,  金玉兰 ,  彭曦冉

IPC: C07K14/03 ,  C12N15/38 ,  C07K16/08

Abstract: 本发明公开了一种伪狂犬病病毒衣壳蛋白VP5来源的抗原及其应用，涉及免疫化学和分子生物学技术领域。本发明提供了免疫原并高效地制备了VP5抗体，得到同时满足IFA和WB实验需求、特异性强而非特异性弱的抗体，制备获得的抗体可作为PRV内参抗体，亦为VP5功能研究提供了工具。