一种V8蛋白酶的制备方法
    2.
    发明公开

    公开(公告)号:CN114921444A

    公开(公告)日:2022-08-19

    申请号:CN202210561954.4

    申请日:2022-05-23

    摘要: 本发明公开了一种V8蛋白酶的制备方法。所述方法包括如下步骤:使融合蛋白的编码基因在宿主菌或宿主细胞中进行表达,得到所述V8蛋白酶,所述融合蛋白为将PelB信号肽融合于V8蛋白酶的N端后所得;所述PelB信号肽的氨基酸序列如SEQ ID No.7所示。本发明采用四种不同信号肽Sig、DsbA、PelB和STII制备V8蛋白酶,并通过对V8蛋白酶表达量进行分析发现:PelB信号肽可以高效引导V8蛋白酶分泌至周质空间,其表达量显著高于其它信号肽,是V8蛋白酶周质空间分泌表达的最佳信号肽,可用于V8蛋白酶制品的表达和制备工作。

    一种细胞瞬时转染的方法
    4.
    发明公开

    公开(公告)号:CN114958909A

    公开(公告)日:2022-08-30

    申请号:CN202210513278.3

    申请日:2022-05-12

    摘要: 本发明公开了一种细胞瞬时转染的方法。具体地公开了细胞瞬时转染进口试剂国产化替代方法,所述方法包括如下步骤:A1)细胞培养:采用表达培养基培养细胞,得到细胞培养物;A2)转染:将质粒与转染试剂、转染培养基混合,得到质粒与转染试剂复合物,将所述复合物加入所述细胞培养物中进行转染,转染过程中添加转染增强剂;其中:所述转染试剂为TRLIP高效DNA转染试剂,所述转染培养基为转染专用减血清培养基,所述转染补料为OPM‑293ProFeed。本发明方法具有成本低、转染效率高、订购周期短的优点,实现了进口试剂国产化,可降低科研和医疗成本,具有重要经济效益。

    一种组织蛋白酶K的制备方法
    5.
    发明公开

    公开(公告)号:CN114921449A

    公开(公告)日:2022-08-19

    申请号:CN202210561354.8

    申请日:2022-05-23

    摘要: 本发明公开了一种组织蛋白酶K的制备方法。所述方法包括如下步骤:使融合蛋白的编码基因在宿主菌或宿主细胞中进行表达,得到所述组织蛋白酶K;所述融合蛋白为将PelB信号肽融合于组织蛋白酶K的N端后所得。本发明基于原核表达系统采用四种不同信号肽DsbA、OmpA、PelB和STII制备组织蛋白酶K,并通过对组织蛋白酶K表达量进行分析发现:PelB信号肽可以高效引导组织蛋白酶K分泌至周质空间,其表达量显著高于其它信号肽,是组织蛋白酶K周质空间分泌表达的最佳信号肽,不仅在组织蛋白酶K制品的表达和制备中具有良好的应用前景,还对开发组织蛋白酶K的单克隆抗体或小分子抑制剂及治疗骨质疏松症的药物研发具有重要意义。