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公开(公告)号：CN109971676B
公开(公告)日：2022-04-08
申请号：CN201910223068.9
申请日：2019-03-22
申请人： 三峡大学
摘要： 本发明提供了一种快速高通量选育高产异亮氨酸的谷氨酸棒状杆菌（Corynebacteriu mglutamicumB1）及应用方法，以谷氨酸棒杆菌为对象，在30‑37℃，100‑200 r/min的摇床中培养一定时间后，经过常温常压等离子体（ARTP）诱变处理50‑180 s后，接种到0.05‑0.4 mg/mL浓度的磺胺胍培养基中30‑37℃培养1‑2天，经过培养后，利用氨基酸与茚三酮的特异性反应与相对应的菌株发酵上清液进行96孔板高通量筛选，可选育出高产菌株CorynebacteriumglutamicumB1。该菌株在100mL摇瓶发酵30‑48 h的条件下异亮氨酸产量较原始菌株提高了62.03%，且遗传性状稳定。该方法建立了磺胺胍标记初筛和茚三酮多孔板检测的高通量筛选策略，可以广泛应用于高产异亮氨酸的谷氨酸棒状杆菌高通量选育，提高筛选效率，具有巨大的应用价值。
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公开(公告)号：CN109971676A
公开(公告)日：2019-07-05
申请号：CN201910223068.9
申请日：2019-03-22
申请人： 三峡大学
摘要： 本发明提供了一种快速高通量选育高产异亮氨酸的谷氨酸棒状杆菌（CorynebacteriumglutamicumB1）及应用方法，以谷氨酸棒杆菌为对象，在30‑37℃，100‑200 r/min的摇床中培养一定时间后，经过常温常压等离子体（ARTP）诱变处理50‑180 s后，接种到0.05‑0.4 mg/mL浓度的磺胺胍培养基中30‑37℃培养1‑2天，经过培养后，利用氨基酸与茚三酮的特异性反应与相对应的菌株发酵上清液进行96孔板高通量筛选，可选育出高产菌株CorynebacteriumglutamicumB1。该菌株在100mL摇瓶发酵30‑48 h的条件下异亮氨酸产量较原始菌株提高了62.03%，且遗传性状稳定。该方法建立了磺胺胍标记初筛和茚三酮多孔板检测的高通量筛选策略，可以广泛应用于高产异亮氨酸的谷氨酸棒状杆菌高通量选育，提高筛选效率，具有巨大的应用价值。
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公开(公告)号：CN114908079A
公开(公告)日：2022-08-16
申请号：CN202210367357.8
申请日：2019-03-22
申请人： 三峡大学
摘要： 本发明提供了高产异亮氨酸的谷氨酸棒状杆菌的选育方法，以谷氨酸棒杆菌为对象，在30‑37℃，100‑200 r/min的摇床中培养一定时间后，经过常温常压等离子体诱变处理50‑180 s后，接种到0.05‑0.4 mg/mL浓度的磺胺胍培养基中30‑37℃培养1‑2天，经过培养后，利用氨基酸与茚三酮的特异性反应与相对应的菌株发酵上清液进行96孔板高通量筛选，可选育出高产菌株Corynebacterium glutamicum B1。该菌株在100mL摇瓶发酵30‑48 h的条件下异亮氨酸产量较原始菌株提高了62.03%，且遗传性状稳定。该方法建立了磺胺胍标记初筛和茚三酮多孔板检测的高通量筛选策略，可以广泛应用于高产异亮氨酸的谷氨酸棒状杆菌高通量选育，提高筛选效率，具有巨大的应用价值。
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公开(公告)号：CN107365831A
公开(公告)日：2017-11-21
申请号：CN201710585873.7
申请日：2017-07-18
申请人： 三峡大学
CPC分类号： C12Q1/34 , C12Q1/04 , C12Q1/18 , G01N2333/922
摘要： 为从紫外诱变条件下得到的大量突变株中快速筛选桔青霉核酸酶P1高产株，采用TB-RNA平板筛选方法，并考察多种因素对TB-RNA平板上桔青霉核酸酶P1粉红酶解圈形成的影响，优化筛选配方，得到优化反应条件为：超滤水体系，甲苯胺蓝浓度2×10-4mol/L，及RNA加入浓度0.1%，以优化配方在28℃恒温培养箱中反应12h，从培养皿中会发现核酸酶的酶活大小与粉红色酶解圈直径大小呈正相关关系，优化TB-RNA平板法可用于桔青霉核酸酶P1高产菌株的高效筛选。通过紫外诱变共得到116株优化菌株，以酶解圈与菌落的直径比大于1.71为指标，从中筛选出若干菌株进行后期种母摇瓶发酵和发酵摇瓶的验证，证明有6株菌株优于原始菌株，发酵酶活最高提高了23%。
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公开(公告)号：CN109576261A
公开(公告)日：2019-04-05
申请号：CN201910064831.8
申请日：2019-01-23
申请人： 三峡大学
摘要： 本发明提供了一种快速高通量选育高产异亮氨酸的谷氨酸棒状杆菌（Corynebacterium glutamicum B1）及应用方法，以谷氨酸棒杆菌为对象，在30-37℃，100-200r/min的摇床中培养一定时间后，经过常温常压等离子体（ARTP）诱变处理50-180s后，接种到0.05-0.4mg/mL浓度的磺胺胍培养基中30-37℃培养1-2天，经过培养后，利用氨基酸与茚三酮的特异性反应与相对应的菌株发酵上清液进行96孔板高通量筛选，可选育出高产菌株Corynebacterium glutamicum B1。该菌株在100mL摇瓶发酵30-48h的条件下异亮氨酸产量较原始菌株提高了62.03%，且遗传性状稳定。该方法建立了磺胺胍标记初筛和茚三酮多孔板检测的高通量筛选策略，可以广泛应用于高产异亮氨酸的谷氨酸棒状杆菌高通量选育，提高筛选效率，具有巨大的应用价值。
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