公开(公告)号：CN104232563A

公开(公告)日：2014-12-24

申请号：CN201310241711.3

申请日：2013-06-18

Applicant: 上海佳牧生物制品有限公司 ,  上海科立特农科(集团)有限公司 ,  上海市农业科学院

Inventor： 何锡忠 ,  李春华 ,  赵本进 ,  张春玲 ,  倪建平 ,  蒋凤英 ,  彭丽英 ,  张婉华

IPC: C12N5/071 ,  C12N7/00

Abstract: 本发明涉及含猪圆环病毒2型细胞的培养方法，该方法包括单个含猪圆环病毒2型PK15细胞克隆及其亚群的培养：将PCV2/SN07-12种毒接种于无1型猪圆环病毒污染的猪肾细胞(PK15细胞)中，PCV2/SN07-12种毒的微生物保藏登记号为：CCTCC NO：V201304，阳性含猪圆环病毒2型PK15细胞克隆株的筛选、高滴度猪圆环病毒2型的增殖三个步骤，培养得到病毒滴度达107.0TCID50/ml。与现有技术相比，本发明培养得到的细胞具有工艺简单、病毒滴度高、生物学特性稳定等优点。

公开(公告)号：CN103820396A

公开(公告)日：2014-05-28

申请号：CN201210470116.2

申请日：2012-11-19

Applicant: 上海佳牧生物制品有限公司 ,  上海市农业科学院

Inventor： 张春玲 ,  倪建平 ,  訾玉华 ,  何锡忠 ,  李春华 ,  蒋凤英 ,  张婉华 ,  周宗清 ,  彭丽英

IPC: C12N7/00 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明涉及猪流行性腹泻病毒分离培养方法，将仔猪动小肠冲洗干净后利用培养基进行培养，并进行接种，检测为阳性的PEDV样品用生理盐水稀释成体积比为1∶1的悬液，培养收获出现细胞病变(CPE)后收获细胞，继续冻融接种单层vero细胞，利用培养基培养得到出现细胞病变(CPE)后收获细胞，既分离得到猪流行性腹泻病毒。与现有技术相比，本发明的分离成功率高，分离得到的猪流行性腹泻病毒病毒毒力强、分离的病毒纯度高。

公开(公告)号：CN104109678A

公开(公告)日：2014-10-22

申请号：CN201310131737.2

申请日：2013-04-16

Applicant: 上海佳牧生物制品有限公司 ,  上海市农业科学院

Inventor： 张春玲 ,  于瑞嵩 ,  倪建平 ,  李春华 ,  李震 ,  何锡忠 ,  蒋凤英 ,  张婉华 ,  董世娟 ,  周宗清 ,  彭丽英 ,  张俊平

IPC: C12N15/34 ,  C12N15/81 ,  C07K14/01 ,  G01N33/68 ,  A61K39/12 ,  A61K48/00 ,  A61P31/20

Abstract: 一种化学合成的猪圆环病毒Cap蛋白基因、其改造方法及应用，包括PCV2ORF2基因序列的来源及改造、引物的设计与合成、PCV2 ORF2短片段DNA的合成、全长基因的合成及合成后序列、表达载体的构建和目的基因在毕赤酵母中的表达等步骤。本发明综合参考了PTDS法和PAS法，使基因合成费用降低，步骤简单(两步PCR)，错误率低，合成周期短。在整个化学合成的过程中，运用了高保真的Taq酶，使误配的碱基序列能够在合成过程中得以修正，从而最大限度的减少了错误碱基的产生。将该基因克隆入酵母表达载体构建重组表达质粒，重组表达质粒规模发酵后提取的表达产物，可作为检测PCV2抗体的诊断抗原，也可制备亚单位疫苗或核酸疫苗。

公开(公告)号：CN103725795A

公开(公告)日：2014-04-16

申请号：CN201310461343.3

申请日：2013-09-30

Applicant: 上海佳牧生物制品有限公司 ,  上海市农业科学院

Inventor： 赵凯 ,  倪建平 ,  李春华 ,  施伟 ,  赵本进 ,  赵笑 ,  何锡忠 ,  任方方 ,  张春玲 ,  吴洋洋 ,  蒋凤英 ,  胡瑞丽 ,  张俊平

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/68

CPC classification number: C12Q1/70 ,  C12Q1/6844 ,  C12Q2531/119

Abstract: 本发明公开了一种猪圆环病毒2型环介导等温扩增（LAMP）检测方法，包括以下步骤：1）首先设计并合成特异性引物；2）从细胞提取病毒DNA模板；3）目的片段的获得：分别配制LAMP和PCR反应体系，按照LAMP和PCR反应程序进行反应得到目的片段；4）定性LAMP和PCR检测。本发明的检测方法简单、快速、灵敏度高、特异性强、重复性好，并且检测的检测极限极低，灵敏度高，可准确定性检测出猪圆环病毒2型，达到预防和控制猪圆环病毒2型流行的作用。

公开(公告)号：CN101289655B

公开(公告)日：2010-11-03

申请号：CN200710172409.1

申请日：2007-12-17

Applicant: 上海佳牧生物制品有限公司

Inventor： 邹勇 ,  何锡忠 ,  周宗清 ,  倪建平 ,  张春玲 ,  李春华 ,  蒋凤英 ,  张婉华 ,  王英

IPC: C12N7/00

Abstract: 本发明涉及一种制备猪圆环病毒的工艺，该方法包括制备PK15细胞液、采用生物反应器技术与灌注工艺培养猪圆环病毒2型(PCV2)。与现有技术相比，本发明具有病毒产量高、操作方便、病毒效价高、操作空间小、工艺参数控制精确等优点，可用以最终提高PCV2疫苗免疫原性和研制高效的PCV2疫苗。