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公开(公告)号：CN110343675A
公开(公告)日：2019-10-18
申请号：CN201811433497.0
申请日：2018-11-28
申请人： 上海凯赛生物技术研发中心有限公司 , 凯赛生物产业有限公司
摘要： 本发明涉及利用定向进化和同源重组方法制备长链二元酸菌株的方法、利用该方法所获得的可以在酸性条件下生产长链二元酸的菌株及所述菌株的用途。具体而言，本发明涉及通过定向进化CYP52A12基因和同源重组方法制备长链二元酸菌株的方法、利用该方法所获得的可以在酸性条件下生产长链二元酸的菌株及所述菌株的用途。
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公开(公告)号：CN109136297A
公开(公告)日：2019-01-04
申请号：CN201710453415.8
申请日：2017-06-15
申请人： 上海凯赛生物技术研发中心有限公司 , 凯赛生物产业有限公司
CPC分类号： C12P13/001 , C12N9/88 , C12N15/70 , C12Y401/01018
摘要： 本申请提供了一种利用工程化宿主细胞发酵生产1,5‑戊二胺的方法。所述方法能够利用其它单糖，成本低廉，且产率高。
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公开(公告)号：CN108795790A
公开(公告)日：2018-11-13
申请号：CN201710295901.1
申请日：2017-04-28
申请人： 上海凯赛生物技术研发中心有限公司 , 凯赛生物产业有限公司
CPC分类号： C12N1/20 , C12N9/88 , C12Y401/01018
摘要： 本发明涉及一种培养，还涉及其制备方法以及用途。一种培养基，包括以下组份：碳源；氮源；pH缓冲剂；所述pH缓冲剂是磷酸一氢盐和磷酸二氢盐，所述磷酸一氢盐和磷酸二氢盐的摩尔比例为99:1‑30:70，优选为93.2:6.8‑35.2:64.8；在所述培养基中，pH缓冲剂的磷酸根的总浓度为0.01M‑0.3M，优选为0.75M‑0.125M；所述培养基的初始pH值为6‑9，优选7‑8。该培养基的制备方法较为常规。该培养基的用途，是用作摇瓶发酵培养表达L‑赖氨酸脱羧酶的细菌的培养基。本发明的培养基，成本低廉，制备方法简单，在本发明的培养基中培养的蜂房哈夫尼菌，其细胞OD显著提升，所产的L‑赖氨酸脱羧酶产量也显著提高，发酵液对于相同浓度的L‑赖氨酸的转化率也显著提高。
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公开(公告)号：CN108456687A
公开(公告)日：2018-08-28
申请号：CN201710094155.X
申请日：2017-02-21
申请人： 上海凯赛生物技术研发中心有限公司 , 凯赛生物产业有限公司
CPC分类号： C12N15/63 , C12N9/88 , C12N2800/60 , C12N2830/002 , C12N2840/002 , C12P13/001 , C12Y401/01018
摘要： 本发明涉及一种重组表达质粒，还涉及一种含有重组表达质粒的转化子，本发明还涉及该转化子的应用，特别是在发酵生产赖氨酸脱羧酶及发酵生产1,5-戊二胺方面的应用。本发明的技术要点在于一种重组表达质粒，包括：第一启动子；目的基因；对赖氨酸响应的抑制型分子开关如lysC5'-UTR序列；所述第一启动子控制所述目的基因的表达；还包括：第二启动子；所述第一启动子的阻遏蛋白基因；所述第二启动子控制所述lysC5'-UTR序列的转录，并且控制所述第一启动子的阻遏蛋白基因的表达；所述lysC5'-UTR序列位于所述第二启动子和所述第一启动子的阻遏蛋白基因之间。一种转化子，所述转化子包括如上所述的重组表达质粒。本发明的重组表达质粒对赖氨酸响应的表达属于激活型的表达。
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公开(公告)号：CN108796619A
公开(公告)日：2018-11-13
申请号：CN201710312817.6
申请日：2017-05-05
申请人： 上海凯赛生物技术研发中心有限公司 , 凯赛生物产业有限公司
CPC分类号： C40B50/06 , C12N15/1065 , C12Q1/04 , G01N2333/245
摘要： 本发明涉及生物酶突变体文库构建及高或低活力突变株高通量筛选的方法，具体涉及适用于长度高于2000bp的基因如赖氨酸脱羧酶基因的易错PCR定向进化突变体文库的构建方法及高或低活力突变株高通量筛选的方法。本发明采用易错PCR分段突变、PCR整合、DpnI酶消化、系列pH指示剂指示pH变化的方法，解决了常规易错PCR方法无法有效构建长片段基因突变体文库、连接效率低、pH变化超过指示剂指示范围的难题，为从赖氨酸脱羧酶的突变体文库中筛选出酶活提高或降低的突变株提供了快速、简便的方法。
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公开(公告)号：CN108611357A
公开(公告)日：2018-10-02
申请号：CN201611147437.3
申请日：2016-12-13
申请人： 上海凯赛生物技术研发中心有限公司 , 凯赛生物产业有限公司
CPC分类号： C12N15/63 , C12N9/88 , C12N2800/101 , C12N2800/60 , C12P13/001 , C12Y401/01018
摘要： 本发明涉及一种重组表达质粒，还涉及一种含有重组表达质粒的转化子。一种含有重组表达质粒的转化子，所述转化子的宿主菌为蜂房哈夫尼菌，所述重组表达质粒是温控重组表达质粒，所述温控重组表达质粒包含受热不稳定阻遏蛋白调控的启动子和编码多肽的聚核苷酸，该多肽的表达受所述启动子控制。本发明还涉及该转化子在发酵生产L-赖氨酸脱羧酶及发酵生产1,5-戊二胺方面的应用。本发明解决了现在重组质粒在连续传代中出现不稳定的问题。
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公开(公告)号：CN108368477A
公开(公告)日：2018-08-03
申请号：CN201580084443.6
申请日：2015-11-09
申请人： 上海凯赛生物技术研发中心有限公司 , 凯赛生物产业有限公司
摘要： 本发明提供了遗传修饰的微生物，其过表达孔蛋白多肽以增强微生物的赖氨酸和赖氨酸衍生物的产生。本发明还提供了产生此类微生物的方法以及使用该遗传修饰的微生物产生赖氨酸和赖氨酸衍生物的方法。
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公开(公告)号：CN108456668A
公开(公告)日：2018-08-28
申请号：CN201710091152.0
申请日：2017-02-20
申请人： 上海凯赛生物技术研发中心有限公司 , 凯赛生物产业有限公司
CPC分类号： C12N9/88 , C12P13/001 , C12Y401/01018
摘要： 本发明第一方面涉及一种核糖体结合位点，第二方面涉及包含这种核糖体结合位点的重组表达质粒，第三方面涉及包含所述重组表达质粒的转化子，本发明还涉及这种转化子在发酵生产多肽，以及进一步发酵生产1,5-戊二胺的方面的应用。本发明的技术要点是，核糖体结合位点的序列5’-3’包含如下所示的序列之一：a)、GTCATCAAAA；b)、CGCAAAGATA；c)、AAAGATTTAC。本发明能够在一步法利用葡萄糖生产1,5-戊二胺的过程中减少1,5-戊二胺对微生物细胞利用葡萄糖生产L-赖氨酸的毒害作用，提高1,5-戊二胺的产量。
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公开(公告)号：CN106536716A
公开(公告)日：2017-03-22
申请号：CN201480080136.6
申请日：2014-06-26
申请人： 上海凯赛生物技术研发中心有限公司 , 凯赛生物产业有限公司
CPC分类号： C12N9/88 , C12N15/52 , C12P13/001 , C12Y401/01018
摘要： 表达质粒载体包含编码Ldc2多肽、其片段和/或其突变体的多核苷酸序列。骨架质粒能够在宿主细胞中自主复制。宿主细胞不是铜绿假单胞菌细胞。转化体用表达质粒载体转化。转化体不是铜绿假单胞菌。突变宿主细胞包含已整合入宿主细胞染色体的编码Ldc2多肽、片段和/或突变体的多核苷酸序列。多肽、片段和/或突变体包含Ldc2。非天然存在的多核苷酸和/或突变体编码包含Ldc2的多肽。利用所述转化体制备生物基尸胺及通过所述方法制备的生物基尸胺。利用生物基尸胺形成的聚酰胺及组合物。
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公开(公告)号：CN104099308A
公开(公告)日：2014-10-15
申请号：CN201310113874.3
申请日：2013-04-03
申请人： 上海凯赛生物技术研发中心有限公司 , 凯赛生物产业有限公司
CPC分类号： C12N9/1217 , C12Y207/02004
摘要： 本发明公开了一种具有天冬氨酸激酶III活性的多肽，天冬氨酸激酶III的第342位异亮氨酸残基被除了异亮氨酸以外的任意氨基酸残基取代。过量表达本发明的突变型天冬氨酸激酶能够提高赖氨酸产量。这为优化赖氨酸的生物合成提供了更多选择，有助于构建赖氨酸生产菌株或提高赖氨酸产量。
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