转基因的位点特异性整合
    7.
    发明公开

    公开(公告)号:CN108884475A

    公开(公告)日:2018-11-23

    申请号:CN201780012763.X

    申请日:2017-04-11

    摘要: 本发明提供了一种用于将目的基因敲入细胞的方法。所述细胞的基因组含有负选择标记,例如,侧翼为一对重组酶识别位点(RRS)(如attP)的胸苷激酶基因。所述方法涉及向所述细胞中引入靶向性构建体,所述靶向性构建体含有目的基因,所述目的基因的侧翼为第二对RRS,如attB。所述靶向性构建体还在所述载体骨架中含有负选择标记,例如胸苷激酶基因。当识别所述RRS的重组酶被表达时,所述两对RRS之间的重组事件会导致所述目的基因位点特异性地整合在所述细胞的基因组中。在基于所述负选择标记进行选择时,去除亲代细胞、具有非期望整合(如随机整合)的细胞、或具有所述载体骨架的整合的细胞。

    一种Gene drive载体及构建方法

    公开(公告)号:CN108707620A

    公开(公告)日:2018-10-26

    申请号:CN201810497777.1

    申请日:2018-05-22

    发明人: 赵辛 吴兆韡

    IPC分类号: C12N15/63 C12N15/66

    CPC分类号: C12N15/63 C12N15/66

    摘要: 本发明属于生物工程领域,尤其涉及一种Gene drive载体及其构建方法,包括以下步骤:步骤1)cap5A启动子与sgRNA片段的人工合成,步骤2)扩增cas9基因,步骤3)扩增质粒骨架,步骤4)扩增rpsL启动子,步骤5)组装空载体,步骤6)插入靶向的spacer,步骤7)构建载体,本发明尝试结合了新型染色体盒重组酶CcrC2和CRISPR‑Cas9技术,构建了SCCmec killer载体系统,即Gene drive载体,Gene drive载体作用在甲氧西林抗性菌株MRSA,实现了在甲氧西林抗性菌株MRSA中靶向去除葡萄球菌染色体盒SCCmec,从而消除甲氧西林抗性基因。