公开(公告)号：CN101812539B

公开(公告)日：2012-07-04

申请号：CN200910242080.0

申请日：2009-12-03

Applicant: 中国兽医药品监察所

Inventor： 王琴 ,  范学政 ,  赵启祖 ,  刘俊 ,  徐璐 ,  王栋 ,  邹兴启

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/68 ,  G01N21/64

Abstract: 本发明设计一种猪瘟病毒TaqMan-MGB荧光定量RT-PCR鉴别检测试剂盒及其生产方法。本发明针对该猪瘟病毒基因组5′端非编码区的137位存在一个A/G SNP位点设计了野毒株特异的MGB探针，并在两端保守区设计了一套通用引物，经过反转录酶浓度、DNA聚合酶浓度、上下游引物浓度和探针浓度的进一步优化，建立了CSFV TaqMan-MGB PCR鉴别检测方法。灵敏度试验结果显示，该方法与RT-nPCR符合率为94.3％，且灵敏度比RT-nPCR敏感10倍；特异性试验结果显示，17个CSFV质控株检测均为阳性，HCLV株和12个非CSFV病原检出率均为零，说明该方法具有很强的CSFV特异性。该方法仅能检测猪瘟病毒野毒株，而不能检测疫苗株和其它非猪瘟病毒株。从反应时间和试验成本等方面都体现了TaqMan-MGB PCR鉴别检测CSFV的优越性。

公开(公告)号：CN101407788B

公开(公告)日：2012-01-11

申请号：CN200810227225.5

申请日：2008-11-26

Applicant: 中国兽医药品监察所 ,  北京中海生物科技有限公司

Inventor： 王栋 ,  岳雷 ,  孙晔 ,  陈建 ,  马君

IPC: C12N5/06 ,  C12N7/00

Abstract: 本发明涉及一种促进狂犬病病毒增殖的方法。在狂犬病病毒培养的细胞维持液中单一添加精氨酸、亮氨酸、脯氨酸和半胱氨酸分别可提高狂犬病病毒滴度0.68 log LD50/0.03ml～0.24 log LD50/0.03ml。精氨酸、亮氨酸、脯氨酸和半胱氨酸的氨基酸组合也可提高狂犬病病毒滴度。经多克隆荧光抗体染色结果表明，与对照组比较，精氨酸和亮氨酸组病毒吸附由60min缩短为30min，病毒穿膜由90min缩短为60min；经核蛋白单克隆荧光抗体染色结果表明，病毒核蛋白合成由21h缩短为18h；经狂犬病病毒抗原检测试剂盒检测培养液，病毒阳性检出由54h提前到42h。该方法简便有效，在狂犬病疫苗生产中有其实用性。

公开(公告)号：CN106492210A

公开(公告)日：2017-03-15

申请号：CN201611107259.1

申请日：2016-12-06

Applicant: 中国兽医药品监察所

Inventor： 陈小云 ,  王栋 ,  张敏 ,  王磊 ,  王静文

IPC: A61K39/09 ,  A61P31/04

CPC classification number: A61K39/09 ,  A61K2039/521 ,  A61K2039/55588

Abstract: 本发明涉及一种山羊传染性胸膜肺炎灭活疫苗及其制备方法。本发明采用山羊支原体山羊肺炎亚种C87001株，接种适宜培养基，收获培养物，经浓缩、硫柳汞灭活后，加矿物油佐剂混合乳化制成。用于预防山羊支原体山羊肺炎亚种引起的山羊传染性胸膜肺炎；采用本发明提出的液体培养基生产山羊传染性胸膜肺炎灭活疫苗，较原组织灭活疫苗具有明显的优势，即大大降低了疫苗生产过程中的生物安全风险、降低了生产成本，且所制备的疫苗不易出现过敏反应，安全性更高。

公开(公告)号：CN101812539A

公开(公告)日：2010-08-25

申请号：CN200910242080.0

申请日：2009-12-03

Applicant: 中国兽医药品监察所

Inventor： 王琴 ,  范学政 ,  赵启祖 ,  刘俊 ,  徐璐 ,  王栋 ,  邹兴启

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/68 ,  G01N21/64

Abstract: 本发明设计一种猪瘟病毒TaqMan-MGB荧光定量RT-PCR鉴别检测试剂盒及其生产方法。本发明针对该猪瘟病毒基因组5′端非编码区的137位存在一个A/G SNP位点设计了野毒株特异的MGB探针，并在两端保守区设计了一套通用引物，经过反转录酶浓度、DNA聚合酶浓度、上下游引物浓度和探针浓度的进一步优化，建立了CSFV TaqMan-MGB PCR鉴别检测方法。灵敏度试验结果显示，该方法与RT-nPCR符合率为94.3％，且灵敏度比RT-nPCR敏感10倍；特异性试验结果显示，17个CSFV质控株检测均为阳性，HCLV株和12个非CSFV病原检出率均为零，说明该方法具有很强的CSFV特异性。该方法仅能检测猪瘟病毒野毒株，而不能检测疫苗株和其它非猪瘟病毒株。从反应时间和试验成本等方面都体现了TaqMan-MGB PCR鉴别检测CSFV的优越性。

公开(公告)号：CN101407788A

公开(公告)日：2009-04-15

申请号：CN200810227225.5

申请日：2008-11-26

Applicant: 中国兽医药品监察所 ,  北京海淀中海动物保健科技公司

Inventor： 王栋 ,  岳雷 ,  孙晔 ,  陈建 ,  马君

IPC: C12N5/06 ,  C12N7/00

Abstract: 本发明涉及一种促进狂犬病病毒增殖的方法。在狂犬病病毒培养的细胞维持液中单一添加精氨酸、亮氨酸、脯氨酸和半胱氨酸分别可提高狂犬病病毒滴度0.68 log LD50/0.03ml～0.24 log LD50/0.03ml。精氨酸、亮氨酸、脯氨酸和半胱氨酸的氨基酸组合也可提高狂犬病病毒滴度。经多克隆荧光抗体染色结果表明，与对照组比较，精氨酸和亮氨酸组病毒吸附由60min缩短为30min，病毒穿膜由90min缩短为60min；经核蛋白单克隆荧光抗体染色结果表明，病毒核蛋白合成由21h缩短为18h；经狂犬病病毒抗原检测试剂盒检测培养液，病毒阳性检出由54h提前到42h。该方法简便有效，在狂犬病疫苗生产中有其实用性。