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公开(公告)号：CN109874661A
公开(公告)日：2019-06-14
申请号：CN201910159209.5
申请日：2019-03-04
申请人： 中国农业大学
IPC分类号： A01H1/02
摘要： 本发明涉及一种打破苹果自交不亲和性获得子代的方法，以长势良好，发育健壮的苹果树为母本植株，对不同开放状态花蕾进行分类，定义花苞已膨大，但花苞仍在萼片包裹下的花为1龄花，定义花苞即将突出萼片包裹的花为2龄花，定义花苞已突破萼片包裹但并未展开的花为3龄花，定义花苞即将展开开放的花为4龄花，选取2-3龄花进行自花授粉。本发明提供了苹果开花前花龄的分类方式，通过对开花前不同花龄花柱进行自花授粉，在一定程度上克服了由自交不亲和性所引起的生殖隔离，并成功获得了后代。本发明的方法可以在苹果中较为简便的获得通过常规授粉手段难以获得的自交后代，为苹果育种过程中获得等位基因纯合的遗传材料提供有效手段。
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公开(公告)号：CN109470778A
公开(公告)日：2019-03-15
申请号：CN201811136170.7
申请日：2018-09-28
申请人： 中国农业大学
摘要： 本发明属于分子生物学和基因功能领域，涉及一种利用自花授粉及异花授粉的苹果花柱筛选差异蛋白的方法，涉及1个在苹果花柱自花授粉及异花授粉过程中差异表达的钙调蛋白结合转录因子。本发明公开了利用自花授粉及异花授粉的苹果花柱筛选差异蛋白的方法，自花授粉及异花授粉的苹果花柱所筛选的钙调蛋白结合转录因子差异倍数均在1-1.5倍之间，明确了在苹果自花授粉过程中有钙调蛋白结合转录因子的参与。
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公开(公告)号：CN109061133A
公开(公告)日：2018-12-21
申请号：CN201810748383.9
申请日：2018-07-10
申请人： 中国农业大学
IPC分类号： G01N33/533 , G01N21/64
摘要： 本发明属于植物生物技术领域，涉及一种标记苹果授粉后花粉管微丝细胞骨架的试剂盒及方法。先提供一种标记苹果授粉后花粉管微丝细胞骨架的试剂盒，包括：花柱固定液试剂A，花柱洗涤液试剂B，微丝染料试剂C和胼胝质免疫荧光试剂D。再应用所述试剂盒标记微丝细胞骨架，步骤为：1)取授粉的花柱；2)用花柱固定液试剂A对花柱固定；3)用花柱洗涤液试剂B对花柱洗涤；4)用微丝染料试剂C和胼胝质免疫荧光试剂D的混合溶液对花柱染色；5)对花柱滴加抗荧光猝灭剂，在激光共聚焦显微镜下观察花柱中花粉管微丝细胞骨架。本发明所述试剂盒和方法实现了快速、灵敏、准确、简便地观察苹果花粉管内微丝骨架的结构与排列方式。
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公开(公告)号：CN108998494A
公开(公告)日：2018-12-14
申请号：CN201810658372.1
申请日：2018-06-25
申请人： 中国农业大学
摘要： 本发明公开了一种动态记录苹果花粉管微丝形态的方法及其试剂盒，本研究以同一地域、同一树龄(10年)、生长势一致的‘金冠’苹果树上的一年生枝条上的大气球期中心花为材料，经过花朵采摘，4℃低温短时期保存，花粉常温干燥、花粉基因枪轰击微丝的marker，Lat52-lifeact基因，固体培养基培养2-3h，激光共聚焦观察正常生长过程中微丝骨架排列方式。为直观观察木本植物花粉管内微丝骨架结构与排列方式提供技术支持。
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公开(公告)号：CN111321237B
公开(公告)日：2020-11-24
申请号：CN201911200051.8
申请日：2019-11-29
申请人： 中国农业大学
IPC分类号： C12Q1/6895 , C12N15/11 , C12Q1/686
摘要： 本发明涉及一种基于SSR标记的‘惠’自花结实性后代的高效选育试剂盒，公开一种与‘惠’自花结实性有关的SSR分子标记Ch04d02。在‘惠’自花结实性后代中表现114bp：126bp基因分型。本发明还提供一种用于鉴定上述SSR分子标记的引物，通过该分子标记及引物建立高效的分子标记辅助选择育种体系，能够在‘惠’后代中高效筛选出具有自花结实性的苹果种质，从而创制自花结实性的苹果品种。
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公开(公告)号：CN110257354B
公开(公告)日：2020-06-02
申请号：CN201910566320.6
申请日：2019-06-27
申请人： 中国农业大学
IPC分类号： C12N9/22
摘要： 本发明涉及一种苹果花柱S‑RNase的高效纯化方法，摘取苹果大气球期至盛花期的花朵，将花柱组织摘取后速冻，花柱组织放置在1.5ml EP管中，丙酮浸没，玻璃杵在避免空气接触的情况下磨碎花柱组织，脱去色素，沉淀用蛋白提取Buffer重悬，0.22μm硝酸纤维素膜过滤杂质后上阳离子交换柱，用Buffer A洗阳离子交换柱后高盐梯度洗脱，即可获得高纯度的S‑RNase蛋白。本发明提供了高效获得苹果花柱内源S‑RNase蛋白的方法，缩短了纯化时间，提高了蛋白得率。本发明提供的方法可以提高苹果自交不亲和性分子机制的研究效率，推动苹果自交不亲和性的研究进程，最终服务苹果育种。
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公开(公告)号：CN110923351A
公开(公告)日：2020-03-27
申请号：CN201911189115.9
申请日：2019-11-28
申请人： 中国农业大学
IPC分类号： C12Q1/6895 , C12N15/11
摘要： 本发明涉及‘寒富’杂种后代自花结实性的SNP分子标记及应用。‘寒富’杂种后代自花结实性的SNP位点对应于金冠苹果基因组GDDH13v1.1版本参考序列4号染色体上的第25831655位突变。本发明还提供一种用于鉴定上述SNP分子标记的引物，通过该分子标记及引物建立高效准确的分子标记辅助育种，通过优选该SNP分子标记的优势等位基因，能够选择‘寒富’杂种后代中自花结实性高的品系，从而培育出具有自花结实性的苹果品种。
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公开(公告)号：CN108977451A
公开(公告)日：2018-12-11
申请号：CN201810793938.1
申请日：2018-07-19
申请人： 中国农业大学
摘要： 本发明涉及一种利用免疫共沉淀从苹果花粉管中获得级联激酶蛋白的方法。本发明属于分子生物学和基因功能领域，涉及2个在苹果花粉管生长过程中发挥重要调控作用的促分裂原活化蛋白质激酶MdMAPK3和MdMAPKK4基因，MdMAPK3基因含有1110个核苷酸，编码370个氨基酸，属于MAPK家族成员；MdMAPKK4基因含有1068个核苷酸，编码356个氨基酸，属于MAPKK家族成员。本发明公开了在苹果自交不亲和反应中，由花粉管蛋白激酶MdMAPK3筛选上游蛋白激酶MdMAPKK4并验证其互作关系的方法。
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公开(公告)号：CN109061133B
公开(公告)日：2019-11-05
申请号：CN201810748383.9
申请日：2018-07-10
申请人： 中国农业大学
IPC分类号： G01N33/533 , G01N21/64
摘要： 本发明属于植物生物技术领域，涉及一种标记苹果授粉后花粉管微丝细胞骨架的试剂盒及方法。先提供一种标记苹果授粉后花粉管微丝细胞骨架的试剂盒，包括：花柱固定液试剂A，花柱洗涤液试剂B，微丝染料试剂C和胼胝质免疫荧光试剂D。再应用所述试剂盒标记微丝细胞骨架，步骤为：1)取授粉的花柱；2)用花柱固定液试剂A对花柱固定；3)用花柱洗涤液试剂B对花柱洗涤；4)用微丝染料试剂C和胼胝质免疫荧光试剂D的混合溶液对花柱染色；5)对花柱滴加抗荧光猝灭剂，在激光共聚焦显微镜下观察花柱中花粉管微丝细胞骨架。本发明所述试剂盒和方法实现了快速、灵敏、准确、简便地观察苹果花粉管内微丝骨架的结构与排列方式。
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公开(公告)号：CN109254092A
公开(公告)日：2019-01-22
申请号：CN201811136907.5
申请日：2018-09-28
申请人： 中国农业大学
摘要： 本发明属于分子生物学和基因工程领域，涉及一种苹果花柱自花与异花授粉差异SUMO激酶蛋白筛选方法，尤其涉及两个苹果SUMO激酶分子，涉及2个在苹果花柱自花授粉及异花授粉过程中差异表达的SUMO激酶SUMO-activating enzyme subunit 1和SUMO-activating enzyme subunit 2，两个SUMO激酶都含有激酶结构域，属于SUMO家族成员。本发明公开了在利用自花授粉及异花授粉的苹果花柱筛选差异蛋白的方法，自花授粉及异花授粉所筛选的SUMO激酶差异倍数均在1-1.5倍之间，明确了在苹果自花授粉过程中有SUMO化修饰的参与。
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