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公开(公告)号：CN108318679A
公开(公告)日：2018-07-24
申请号：CN201710037998.6
申请日：2017-01-18
申请人： 中国农业大学
IPC分类号： G01N33/533
摘要： 本发明提供一种定位木本植物花粉管蛋白的免疫荧光方法及其试剂盒。所述试剂盒中包括固定液、酶解液、封闭液、一抗和二抗；所述固定液中含有PEPES、蔗糖、TritonX-100、多聚甲醛、NaCl、KCl、Na2HPO4和KH2PO4，所述酶解液中含有纤维素酶、离析酶、NaCl、KCl、Na2HPO4和KH2PO4，所述封闭液中含有牛血清白蛋白、NaCl、KCl、Na2HPO4和KH2PO4，所述一抗为目的蛋白抗体，所述二抗为FITC标记的山羊抗兔二抗。本发明以苹果花粉管为试材，通过酶解花粉管壁后，进行免疫荧光标记。采用本发明的方法可以直接、高效、灵敏、特异性的定位花粉管中的功能蛋白，为直观鉴定木本植物花粉管内功能蛋白的表达及定位提供技术体系。
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公开(公告)号：CN106699859A
公开(公告)日：2017-05-24
申请号：CN201710179402.6
申请日：2017-03-23
申请人： 中国农业大学
IPC分类号： C07K14/415 , C07K1/14
摘要： 本发明提供一种提取木本植物花粉管核蛋白的方法及其试剂盒。所述试剂盒中包括试剂A、试剂B和试剂C；所述试剂A中含有纤维素酶和离析酶，所述试剂B中含有Hepes、NaCl、MgCl2、NaF、PMSF和DTT，所述试剂C中含有丙三醇、TritonX‑100、DTT和PMSF。本发明以苹果花粉管为试材，通过收集、酶解花粉管壁后，进行核蛋白提取。采用本发明的方法可以提取大量、相对纯净的花粉管核蛋白，为直观鉴定木本植物花粉管内核蛋白的表达及定量提供技术体系。
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公开(公告)号：CN109470778A
公开(公告)日：2019-03-15
申请号：CN201811136170.7
申请日：2018-09-28
申请人： 中国农业大学
摘要： 本发明属于分子生物学和基因功能领域，涉及一种利用自花授粉及异花授粉的苹果花柱筛选差异蛋白的方法，涉及1个在苹果花柱自花授粉及异花授粉过程中差异表达的钙调蛋白结合转录因子。本发明公开了利用自花授粉及异花授粉的苹果花柱筛选差异蛋白的方法，自花授粉及异花授粉的苹果花柱所筛选的钙调蛋白结合转录因子差异倍数均在1-1.5倍之间，明确了在苹果自花授粉过程中有钙调蛋白结合转录因子的参与。
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公开(公告)号：CN109061133A
公开(公告)日：2018-12-21
申请号：CN201810748383.9
申请日：2018-07-10
申请人： 中国农业大学
IPC分类号： G01N33/533 , G01N21/64
摘要： 本发明属于植物生物技术领域，涉及一种标记苹果授粉后花粉管微丝细胞骨架的试剂盒及方法。先提供一种标记苹果授粉后花粉管微丝细胞骨架的试剂盒，包括：花柱固定液试剂A，花柱洗涤液试剂B，微丝染料试剂C和胼胝质免疫荧光试剂D。再应用所述试剂盒标记微丝细胞骨架，步骤为：1)取授粉的花柱；2)用花柱固定液试剂A对花柱固定；3)用花柱洗涤液试剂B对花柱洗涤；4)用微丝染料试剂C和胼胝质免疫荧光试剂D的混合溶液对花柱染色；5)对花柱滴加抗荧光猝灭剂，在激光共聚焦显微镜下观察花柱中花粉管微丝细胞骨架。本发明所述试剂盒和方法实现了快速、灵敏、准确、简便地观察苹果花粉管内微丝骨架的结构与排列方式。
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公开(公告)号：CN108998494A
公开(公告)日：2018-12-14
申请号：CN201810658372.1
申请日：2018-06-25
申请人： 中国农业大学
摘要： 本发明公开了一种动态记录苹果花粉管微丝形态的方法及其试剂盒，本研究以同一地域、同一树龄(10年)、生长势一致的‘金冠’苹果树上的一年生枝条上的大气球期中心花为材料，经过花朵采摘，4℃低温短时期保存，花粉常温干燥、花粉基因枪轰击微丝的marker，Lat52-lifeact基因，固体培养基培养2-3h，激光共聚焦观察正常生长过程中微丝骨架排列方式。为直观观察木本植物花粉管内微丝骨架结构与排列方式提供技术支持。
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公开(公告)号：CN108977451A
公开(公告)日：2018-12-11
申请号：CN201810793938.1
申请日：2018-07-19
申请人： 中国农业大学
摘要： 本发明涉及一种利用免疫共沉淀从苹果花粉管中获得级联激酶蛋白的方法。本发明属于分子生物学和基因功能领域，涉及2个在苹果花粉管生长过程中发挥重要调控作用的促分裂原活化蛋白质激酶MdMAPK3和MdMAPKK4基因，MdMAPK3基因含有1110个核苷酸，编码370个氨基酸，属于MAPK家族成员；MdMAPKK4基因含有1068个核苷酸，编码356个氨基酸，属于MAPKK家族成员。本发明公开了在苹果自交不亲和反应中，由花粉管蛋白激酶MdMAPK3筛选上游蛋白激酶MdMAPKK4并验证其互作关系的方法。
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公开(公告)号：CN109061133B
公开(公告)日：2019-11-05
申请号：CN201810748383.9
申请日：2018-07-10
申请人： 中国农业大学
IPC分类号： G01N33/533 , G01N21/64
摘要： 本发明属于植物生物技术领域，涉及一种标记苹果授粉后花粉管微丝细胞骨架的试剂盒及方法。先提供一种标记苹果授粉后花粉管微丝细胞骨架的试剂盒，包括：花柱固定液试剂A，花柱洗涤液试剂B，微丝染料试剂C和胼胝质免疫荧光试剂D。再应用所述试剂盒标记微丝细胞骨架，步骤为：1)取授粉的花柱；2)用花柱固定液试剂A对花柱固定；3)用花柱洗涤液试剂B对花柱洗涤；4)用微丝染料试剂C和胼胝质免疫荧光试剂D的混合溶液对花柱染色；5)对花柱滴加抗荧光猝灭剂，在激光共聚焦显微镜下观察花柱中花粉管微丝细胞骨架。本发明所述试剂盒和方法实现了快速、灵敏、准确、简便地观察苹果花粉管内微丝骨架的结构与排列方式。
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公开(公告)号：CN109254092A
公开(公告)日：2019-01-22
申请号：CN201811136907.5
申请日：2018-09-28
申请人： 中国农业大学
摘要： 本发明属于分子生物学和基因工程领域，涉及一种苹果花柱自花与异花授粉差异SUMO激酶蛋白筛选方法，尤其涉及两个苹果SUMO激酶分子，涉及2个在苹果花柱自花授粉及异花授粉过程中差异表达的SUMO激酶SUMO-activating enzyme subunit 1和SUMO-activating enzyme subunit 2，两个SUMO激酶都含有激酶结构域，属于SUMO家族成员。本发明公开了在利用自花授粉及异花授粉的苹果花柱筛选差异蛋白的方法，自花授粉及异花授粉所筛选的SUMO激酶差异倍数均在1-1.5倍之间，明确了在苹果自花授粉过程中有SUMO化修饰的参与。
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公开(公告)号：CN108424876A
公开(公告)日：2018-08-21
申请号：CN201710081736.X
申请日：2017-02-15
申请人： 中国农业大学
摘要： 本发明提供一种用于标记植物花粉微丝微管细胞骨架的试剂盒，包括花粉固定液试剂A，花粉洗涤液试剂B，花粉微丝染料试剂组合C，以及花粉微管染料试剂组合D。本发明还提供利用该试剂盒标记植物花粉微丝微管细胞骨架的方法，具体流程如下：培养花粉—固定花粉管—洗涤花粉管—微丝染料室温染色花粉管—微管染料室温染色花粉管—激光共聚焦显微镜观察。本方法可实现快速、灵敏、准确性高、简便地观察木本植物花粉管内微丝微管骨架结构与排列方式，为直观观察木本植物花粉管内微丝微管骨架结构与排列方式提供技术支持。
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公开(公告)号：CN106801066A
公开(公告)日：2017-06-06
申请号：CN201710039678.4
申请日：2017-01-18
申请人： 中国农业大学
摘要： 本发明提供一种高效木本植物花粉基因枪瞬时转化方法及其试剂盒。所述试剂盒中包括以下试剂组合：用于配制金粉悬液的试剂、用于制备DNA子弹的试剂以及花粉液体培养基。本发明以苹果花粉为试材，通过水合花粉、DNA子弹制备以及利用氦气轰击刚萌发的花粉粒，进行高效的基因枪瞬时转化。采用本发明的方法可实现快速、灵敏、准确性高、简便地验证木本植物材料花粉管基因的功能，为直观鉴定木本植物花粉管内基因表达及功能验证提供技术体系。
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