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公开(公告)号：CN104278015B
公开(公告)日：2018-05-01
申请号：CN201410466752.7
申请日：2014-09-12
申请人： 中国农业大学
摘要： 本发明提供了一株过表达内源虾青素合成酶基因得到的法夫酵母高产虾青素基因工程菌株，通过游离质粒过表达虾青素合成酶基因crtS,获得了高产虾青素的法夫酵母基因工程菌株(MK19‑pGBKT7crtS)，将其定名为CSR19。该菌株表达的crtS基因前带有内源的核糖体结合位点序列(简称Rbs.序列)。经发酵培养并与受体菌株MK19相比，该工程菌株的虾青素产量提高了33.5％，且稳定性好，在饲料工业中具有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN105861465A
公开(公告)日：2016-08-17
申请号：CN201610368110.2
申请日：2013-07-16
申请人： 中国农业大学
摘要： 本发明提供了一种高效异源表达白圆弧青霉脂肪酶的毕赤酵母。本发明将包含自身前导肽(7个氨基酸)的白圆弧青霉脂肪酶在巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)基因工程菌中异源表达，增加了外源蛋白脂肪酶的活性，改善了外源蛋白脂肪酶的部分酶学性质。本发明提供的产酶培养基通过优化BMMY培养基中YNB组分，降低培养基成本达70％。本发明为该酶的工业化应用，特别是在以雨生红球藻虾青素酯为底物，催化该底物水解产生虾青素单体中提供了可靠的实验依据。
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公开(公告)号：CN101434921B
公开(公告)日：2011-08-17
申请号：CN200710177452.7
申请日：2007-11-15
申请人： 中国农业大学
IPC分类号： C12N1/20
摘要： 本发明提供了一种培养磁细菌生产磁小体的方法，其以空气作为供养方式，通过补料的方式使得磁细菌持续生长，当溶氧达到或低于适合生产磁小体的溶氧时，通过将搅拌转速和/或空气流速与溶氧进行级联来控制溶氧在适宜磁小体生产的溶氧范围。本发明不用配气和纯的惰性气体而以通空气作为供氧方式可以将初始溶氧从100％饱和溶氧降至0％，配合搅拌转速和通气流速的调节可控制溶氧为0～20％饱和溶氧之间的任何值。从而降低了磁小体的生产成本，并对以后研究磁细菌在不同溶氧水平下的生理生化特点提供了技术保障。
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公开(公告)号：CN101372364A
公开(公告)日：2009-02-25
申请号：CN200810223498.2
申请日：2008-09-28
申请人： 中国农业大学
摘要： 本发明提供了一种大规模纯化细菌磁小体的方法，它包括用高压均质机破碎趋磁细菌细胞、磁性层析系统分离清洗磁小体、蛋白酶k消化膜蛋白、电洗脱以及磁性搅拌系统脱盐等步骤。采用本发明所述的方法，操作连续，纯化周期从2－3个月缩短至一周内，并能有效降低超声破碎对磁小体质膜的损伤，减少磁小体表面的膜蛋白，降低所纯化磁小体的免疫原性。
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公开(公告)号：CN101195813A
公开(公告)日：2008-06-11
申请号：CN200810055661.9
申请日：2008-01-04
申请人： 中国农业大学
摘要： 本发明提供了一种高效快速的单细胞微生物的破壁方法，该方法首先将细胞制备成10～30％的细胞悬液通入高压均质机中，对于原核单细胞微生物而言，设置压力为60～90MPa，对于真核单细胞微生物，则设置压力为90～150MPa，流速5～80升/小时，循环1～4次，即可对细菌或酵母实现100％的破壁。本发明方法可有效地应用于发酵工程产物提取工艺，节约时间，提高生产效率，并且无需任何化学药物辅助，尤其适用于发酵工业。
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公开(公告)号：CN1724672A
公开(公告)日：2006-01-25
申请号：CN200510082992.8
申请日：2005-07-08
申请人： 中国农业大学
摘要： 本发明公开了一种组成型表达载体及其应用。其目的是提供一种可在汉逊酵母中组成型表达外源基因的组成型表达载体及利用该组成型表达载体表达耐高温木聚糖酶的方法。该组成型表达载体是含有PMA1启动子序列，多形汉逊酵母rDNA序列和分泌信号肽编码基因序列的真核细胞表达载体。表达耐高温木聚糖酶的方法，包括以下步骤：1)将耐高温木聚糖酶编码基因插入权利要求1、2或3所述的组成型表达载体中，得到耐高温木聚糖酶组成型表达载体；2)将所述耐高温木聚糖酶组成型表达载体导入多形汉逊酵母中，得到表达耐高温木聚糖酶的工程菌；3)培养所述工程菌72－80小时，得到耐高温木聚糖酶。
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公开(公告)号：CN1544640A
公开(公告)日：2004-11-10
申请号：CN200310113562.9
申请日：2003-11-17
申请人： 中国农业大学
摘要： 本发明公开了一种耐高温木聚糖酶的表达方法及其专用表达载体。本发明所提供的耐高温木聚糖酶表达载体，是含有耐高温木聚糖酶基因xynB(64)的重组毕赤酵母表达载体pPIC9K－xynB(64)。本发明所提供的表达耐高温木聚糖酶的方法，是将重组毕赤酵母表达载体pPIC9K－xynB(64)转化到毕赤酵母中，得到阳性克隆，诱导培养所述阳性克隆，表达耐高温木聚糖酶。本发明的木聚糖酶分泌量达207mg/L培养液，酶活达522U/mg(蛋白)。该木聚糖酶的最适作用温度为90℃，在沸水浴中处理30分钟后，酶活力仍能保持最高酶活力的70％，该酶活性在90℃检测时，其pH值稳定性在6.2～10.0范围内。本发明的方法在耐高温木聚糖酶的生产中具有广阔的工业前景。
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公开(公告)号：CN104278048B
公开(公告)日：2017-05-17
申请号：CN201310291562.1
申请日：2013-07-11
申请人： 中国农业大学
摘要： 本发明提供了一种重组磁螺菌及其构建方法。具体为首先构建丢失了磁小体膜蛋白基因的趋磁细菌突变株，然后将一个磁小体膜蛋白基因与一个功能性蛋白基因进行基因融合，连接到pMD18‑T Simple Vector上，转化入E.coli DH5α感受态细胞，构建得到重组质粒。通过本发明方法构建得到的重组磁螺菌可用于合成表面展示有功能性蛋白的磁小体，所述磁小体可以很容易地与抗体，乃至核酸、糖类、脂类、非抗体蛋白等功能性蛋白相连，形成具有特定功能的磁性复合体，该复合体既能够用于磁性分离，还可以组装成特定结构的磁性材料或构件。
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公开(公告)号：CN103275915B
公开(公告)日：2014-12-03
申请号：CN201310221457.0
申请日：2013-06-05
申请人： 中国农业大学
摘要： 本发明涉及一种产聚羟基烷酸的重组大肠杆菌突变株，应用于聚羟基烷酸生产。所述重组突变株为大肠杆菌Escherichia coli SM(pDP)，为重组质粒pDP导入宿主突变株所得。所述重组突变株为大肠埃希氏菌(Escherichia coli)，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏日期为2013年4月28日，保藏编号为CGMCC NO.7530。本发明重组突变株最显著的特征是生长迅速，适合在合成培养基中生长，成本低，发酵过程稳定，聚羟基烷酸产量高。
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