公开(公告)号：CN105087620B

公开(公告)日：2017-12-29

申请号：CN201510547191.8

申请日：2015-08-31

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 李秋艳 ,  索勋 ,  黄广平 ,  李志远 ,  李向清 ,  刘贤勇 ,  付怡静 ,  王一丁 ,  田秀玲 ,  索静霞 ,  胡丹丹

IPC: C12N15/66 ,  C12N15/85 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明提供了一种过表达猪共刺激受体4‑1BB载体及其应用。PCR扩增rosa26基因内含子1左右同源臂，4‑1BB调控序列，OCT4特异启动子；将同源左臂、4‑1BB表达框、含LoxP位点的Cre、Neo表达框、同源右臂、负筛选DTA依次连接，得到4‑1BB同源重组载体p4BOCNDR。将该载体与含特异性靶向猪rosa26基因内含子1的sgRNA的CRISPR/Cas9打靶载体共转入猪胎儿成纤维细胞中，以阳性细胞为供体细胞，卵母细胞为受体细胞，通过体细胞核移植技术获得克隆胚胎；将克隆胚胎移入猪子宫内妊娠获得在rosa26基因第一内含子定点整合有4‑1BB基因且自动删除标记基因的转基因猪。

公开(公告)号：CN105087620A

公开(公告)日：2015-11-25

申请号：CN201510547191.8

申请日：2015-08-31

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 李秋艳 ,  索勋 ,  黄广平 ,  李志远 ,  李向清 ,  刘贤勇 ,  付怡静 ,  王一丁 ,  田秀玲 ,  索静霞 ,  胡丹丹

IPC: C12N15/66 ,  C12N15/85 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明提供了一种过表达猪共刺激受体4-1BB载体及其应用。PCR扩增rosa26基因内含子1左右同源臂，4-1BB调控序列，OCT4特异启动子；将同源左臂、4-1BB表达框、含LoxP位点的Cre、Neo表达框、同源右臂、负筛选DTA依次连接，得到4-1BB同源重组载体p4BOCNDR。将该载体与含特异性靶向猪rosa26基因内含子1的sgRNA的CRISPR/Cas9打靶载体共转入猪胎儿成纤维细胞中，以阳性细胞为供体细胞，卵母细胞为受体细胞，通过体细胞核移植技术获得克隆胚胎；将克隆胚胎移入猪子宫内妊娠获得在rosa26基因第一内含子定点整合有4-1BB基因且自动删除标记基因的转基因猪。

公开(公告)号：CN105112449A

公开(公告)日：2015-12-02

申请号：CN201510557737.8

申请日：2015-09-02

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 索勋 ,  李秋艳 ,  黄广平 ,  刘贤勇 ,  李志远 ,  李向清 ,  付怡静 ,  王一丁 ,  田秀玲 ,  索静霞 ,  胡丹丹 ,  徐邢宾 ,  沈良才

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/66 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明提供一种CD28基因过表达载体及其应用，所述过表达载体是以目标生物基因组为模板，PCR扩增ROSA26基因第一内含子的左、右同源臂，CD28基因表达框，OCT4基因启动子，然后将同源左臂，CD28基因表达框，含LoxP位点的OCT4基因启动子调控的Cre表达框和Neo基因表达框，同源右臂以及负筛选标记DTA依次连接，并构建到真核表达载体上得到。将该载体与含特异性靶向猪ROSA26基因第一内含子的CRISPR/Cas9打靶载体共转入猪胎儿成纤维细胞中，以阳性细胞为供体细胞，卵母细胞为受体细胞，通过体细胞核移植技术获得克隆胚胎；将克隆胚胎移入猪子宫内妊娠获得在ROSA26基因第一内含子定点整合有CD28基因且自动敲除标记基因的转基因猪。

公开(公告)号：CN104673830A

公开(公告)日：2015-06-03

申请号：CN201410042182.9

申请日：2014-01-28

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 刘贤勇 ,  索勋 ,  罗雪 ,  索静霞 ,  田秀玲 ,  秦梅 ,  汤新明

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/55 ,  C12N9/16 ,  A01K67/033 ,  A23K1/165

Abstract: 本发明提供了一种提高禽畜钙磷利用率的方法，所述方法包括：1）获取植酸酶基因全长DNA；2）球虫转染载体pMDEA-phytase的制备；3）载体的转染和转基因球虫的筛选；4）将表达植酸酶的转基因球虫通过口服方式接种至畜禽体内，使球虫在肠道内发育的同时表达并释放出植酸酶，降解植酸。本发明首次将不同来源的植酸酶基因表达于球虫中，从而获得重组的微型生物反应器，可产生直接应用于畜禽的植酸酶，无需生产及纯化的设备和相关操作。

公开(公告)号：CN105112449B

公开(公告)日：2018-02-06

申请号：CN201510557737.8

申请日：2015-09-02

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 索勋 ,  李秋艳 ,  黄广平 ,  刘贤勇 ,  李志远 ,  李向清 ,  付怡静 ,  王一丁 ,  田秀玲 ,  索静霞 ,  胡丹丹 ,  徐邢宾 ,  沈良才

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/66 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明提供一种CD28基因过表达载体及其应用，所述过表达载体是以目标生物基因组为模板，PCR扩增ROSA26基因第一内含子的左、右同源臂，CD28基因表达框，OCT4基因启动子，然后将同源左臂，CD28基因表达框，含LoxP位点的OCT4基因启动子调控的Cre表达框和Neo基因表达框，同源右臂以及负筛选标记DTA依次连接，并构建到真核表达载体上得到。将该载体与含特异性靶向猪ROSA26基因第一内含子的CRISPR/Cas9打靶载体共转入猪胎儿成纤维细胞中，以阳性细胞为供体细胞，卵母细胞为受体细胞，通过体细胞核移植技术获得克隆胚胎；将克隆胚胎移入猪子宫内妊娠获得在ROSA26基因第一内含子定点整合有CD28基因且自动敲除标记基因的转基因猪。