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公开(公告)号：CN106191113B
公开(公告)日：2020-01-14
申请号：CN201610614586.X
申请日：2016-07-29
Applicant: 中国农业大学
IPC: C12N15/85 , A01K67/027
Abstract: 本发明公开了一种MC3R基因敲除猪的制备方法。本发明公开的MC3R基因敲除猪的制备方法采用CRISPR/Cas9系统进行，CRISPR/Cas9系统中包含gRNA1的编码基因和gRNA2的编码基因，gRNA1识别MC3R基因的靶序列为序列表中序列1；所述gRNA2识别MC3R基因的靶序列为序列表中序列2。实验证明，利用本发明的MC3R基因敲除猪的制备方法敲除MC3R基因的效率达到29.16％，并且本发明的方法能够快速高效的将目的基因大片段敲除，并且不留下外源基因片段，不仅可以用来研究MC3R基因的作用机制和机理，还可以用于动物育种。
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公开(公告)号：CN105112449A
公开(公告)日：2015-12-02
申请号：CN201510557737.8
申请日：2015-09-02
Applicant: 中国农业大学
IPC: C12N15/85 , C12N15/66 , A01K67/027
Abstract: 本发明提供一种CD28基因过表达载体及其应用，所述过表达载体是以目标生物基因组为模板，PCR扩增ROSA26基因第一内含子的左、右同源臂，CD28基因表达框，OCT4基因启动子，然后将同源左臂，CD28基因表达框，含LoxP位点的OCT4基因启动子调控的Cre表达框和Neo基因表达框，同源右臂以及负筛选标记DTA依次连接，并构建到真核表达载体上得到。将该载体与含特异性靶向猪ROSA26基因第一内含子的CRISPR/Cas9打靶载体共转入猪胎儿成纤维细胞中，以阳性细胞为供体细胞，卵母细胞为受体细胞，通过体细胞核移植技术获得克隆胚胎；将克隆胚胎移入猪子宫内妊娠获得在ROSA26基因第一内含子定点整合有CD28基因且自动敲除标记基因的转基因猪。
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公开(公告)号：CN105112449B
公开(公告)日：2018-02-06
申请号：CN201510557737.8
申请日：2015-09-02
Applicant: 中国农业大学
IPC: C12N15/85 , C12N15/66 , A01K67/027
Abstract: 本发明提供一种CD28基因过表达载体及其应用，所述过表达载体是以目标生物基因组为模板，PCR扩增ROSA26基因第一内含子的左、右同源臂，CD28基因表达框，OCT4基因启动子，然后将同源左臂，CD28基因表达框，含LoxP位点的OCT4基因启动子调控的Cre表达框和Neo基因表达框，同源右臂以及负筛选标记DTA依次连接，并构建到真核表达载体上得到。将该载体与含特异性靶向猪ROSA26基因第一内含子的CRISPR/Cas9打靶载体共转入猪胎儿成纤维细胞中，以阳性细胞为供体细胞，卵母细胞为受体细胞，通过体细胞核移植技术获得克隆胚胎；将克隆胚胎移入猪子宫内妊娠获得在ROSA26基因第一内含子定点整合有CD28基因且自动敲除标记基因的转基因猪。
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公开(公告)号：CN106191113A
公开(公告)日：2016-12-07
申请号：CN201610614586.X
申请日：2016-07-29
Applicant: 中国农业大学
IPC: C12N15/85 , A01K67/027
Abstract: 本发明公开了一种MC3R基因敲除猪的制备方法。本发明公开的MC3R基因敲除猪的制备方法采用CRISPR/Cas9系统进行，CRISPR/Cas9系统中包含gRNA1的编码基因和gRNA2的编码基因，gRNA1识别MC3R基因的靶序列为序列表中序列1；所述gRNA2识别MC3R基因的靶序列为序列表中序列2。实验证明，利用本发明的MC3R基因敲除猪的制备方法敲除MC3R基因的效率达到29.16％，并且本发明的方法能够快速高效的将目的基因大片段敲除，并且不留下外源基因片段，不仅可以用来研究MC3R基因的作用机制和机理，还可以用于动物育种。
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