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公开(公告)号:CN110684799A
公开(公告)日:2020-01-14
申请号:CN201910953813.5
申请日:2019-10-09
Applicant: 中国农业大学
Abstract: 本发明提供一种乳腺特异性表达PEDV单链抗体基因的同源重组载体及应用。所述同源重组载体是以真核表达载体为骨架载体,同源重组载体中至少包括正筛选元件、负筛选标记基因、PEDV单链抗体基因表达盒以及rosa26基因的同源左臂和同源右臂;其中,正筛选元件包括顺次连接的重组酶识别序列-正筛选标记基因-重组酶基因-重组酶识别序列。利用所述同源重组载体转染哺乳动物体细胞,获得的阳性细胞rosa26基因第一个内含子定点整合PEDV单链抗体基因。利用本发明方法成功获得了乳腺特异性表达PEDV单链抗体的转基因猪细胞系,为通过转基因技术制备抗腹泻转基因猪奠定基础。
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公开(公告)号:CN106191064B
公开(公告)日:2019-06-07
申请号:CN201610587597.3
申请日:2016-07-22
Applicant: 中国农业大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/85 , C12N5/10 , C12N15/877 , A01K67/027
Abstract: 本发明涉及基因工程和遗传修饰领域,具体地说,涉及利用CRISPR/Cas9系统对MC4R基因进行编辑,并通过体细胞核移植技术获得MC4R基因敲除猪。本发明首次针对猪MC4R基因的CDS区的两个位点(MC4R基因CDS区的6133‑6152bp序列和7127‑7146bp序列)设计sgRNA,并借助CRISPR‑Cas9系统对两个位点同时进行切割,实现了MC4R基因的大片段删除,并且获得了大片段删除的敲除猪个体,为研究猪MC4R基因提供了一种切实可行的方法。
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公开(公告)号:CN107686518A
公开(公告)日:2018-02-13
申请号:CN201610639357.3
申请日:2016-08-05
Applicant: 中国农业大学
Abstract: 本发明涉及基因工程,具体公开了一种抗大肠杆菌k88ac的单链抗体及其编码基因。本发明将抗k88ac抗原的抗体可变区基因,与猪的抗体恒定区通过linker序列连接,形成scFv-Fc结构。构建CMV启动子调控scFv-Fc基因表达的重组载体k88-p CMV5,使其在细胞水平高效表达。通过western和ELISA检测抗体可正常表达;且具有与k88ac抗原的结合能力。本发明成功获得了针对k88ac大肠杆菌的抗体基因,为得到抗腹泻转基因猪群提供了新方法,对于农业发展具有很大的经济效益。
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公开(公告)号:CN104789593A
公开(公告)日:2015-07-22
申请号:CN201510158978.5
申请日:2015-04-03
Applicant: 中国农业大学
IPC: C12N15/85 , C12N15/66 , A01K67/027
Abstract: 本发明提供了一种基因打靶载体,所述基因打靶载体包括人血清白蛋白基因、正筛选基因、负筛选基因和猪血清白蛋白基因的5’同源臂和3’同源臂,其中,所述正筛选基因的两端具有重组酶识别序列。利用本发明所提供的打靶载体可以实现基因打靶克隆猪纯合子的血液中只表达人血清白蛋白,不表达猪自身的血清白蛋白,利于后续从猪的血液中高效分离纯化人血清白蛋白;从而为利用猪的血液作为生物反应器生产人血清白蛋白的研究和产业化应用提供支持。
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公开(公告)号:CN106755024B
公开(公告)日:2020-06-09
申请号:CN201510811585.X
申请日:2015-11-20
Applicant: 中国农业大学
IPC: C12N15/63 , C12N15/64 , C12N15/85 , C12N5/10 , A01K67/027
Abstract: 本发明涉及一种猪LepR基因敲除打靶载体、其构建方法及应用。本发明提供的猪LepR基因敲除打靶载体,通过同源重组的方式用自我删除元件LOCN替换猪LepR基因第三外显子及其两端的一小段内含子序列,使所有LepR蛋白亚型都缺失信号肽序列,从而真正消除了LepR的信号转导功能,该载体的成功构建既能实现LepR基因敲除猪模型的制备,又为LepR功能的研究及肥胖症治疗药物的开发奠定了基础。
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公开(公告)号:CN105112449B
公开(公告)日:2018-02-06
申请号:CN201510557737.8
申请日:2015-09-02
Applicant: 中国农业大学
IPC: C12N15/85 , C12N15/66 , A01K67/027
Abstract: 本发明提供一种CD28基因过表达载体及其应用,所述过表达载体是以目标生物基因组为模板,PCR扩增ROSA26基因第一内含子的左、右同源臂,CD28基因表达框,OCT4基因启动子,然后将同源左臂,CD28基因表达框,含LoxP位点的OCT4基因启动子调控的Cre表达框和Neo基因表达框,同源右臂以及负筛选标记DTA依次连接,并构建到真核表达载体上得到。将该载体与含特异性靶向猪ROSA26基因第一内含子的CRISPR/Cas9打靶载体共转入猪胎儿成纤维细胞中,以阳性细胞为供体细胞,卵母细胞为受体细胞,通过体细胞核移植技术获得克隆胚胎;将克隆胚胎移入猪子宫内妊娠获得在ROSA26基因第一内含子定点整合有CD28基因且自动敲除标记基因的转基因猪。
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公开(公告)号:CN106191113A
公开(公告)日:2016-12-07
申请号:CN201610614586.X
申请日:2016-07-29
Applicant: 中国农业大学
IPC: C12N15/85 , A01K67/027
Abstract: 本发明公开了一种MC3R基因敲除猪的制备方法。本发明公开的MC3R基因敲除猪的制备方法采用CRISPR/Cas9系统进行,CRISPR/Cas9系统中包含gRNA1的编码基因和gRNA2的编码基因,gRNA1识别MC3R基因的靶序列为序列表中序列1;所述gRNA2识别MC3R基因的靶序列为序列表中序列2。实验证明,利用本发明的MC3R基因敲除猪的制备方法敲除MC3R基因的效率达到29.16%,并且本发明的方法能够快速高效的将目的基因大片段敲除,并且不留下外源基因片段,不仅可以用来研究MC3R基因的作用机制和机理,还可以用于动物育种。
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公开(公告)号:CN106191064A
公开(公告)日:2016-12-07
申请号:CN201610587597.3
申请日:2016-07-22
Applicant: 中国农业大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/85 , C12N5/10 , C12N15/877 , A01K67/027
CPC classification number: C12N15/113 , A01K67/0276 , A01K2217/075 , A01K2227/108 , C07K14/47 , C12N15/85 , C12N15/8778 , C12N2310/10 , C12N2800/107 , C12N2800/80
Abstract: 本发明涉及基因工程和遗传修饰领域,具体地说,涉及利用CRISPR/Cas9系统对MC4R基因进行编辑,并通过体细胞核移植技术获得MC4R基因敲除猪。本发明首次针对猪MC4R基因的CDS区的两个位点(MC4R基因CDS区的6133-6152bp序列和7127-7146bp序列)设计sgRNA,并借助CRISPR-Cas9系统对两个位点同时进行切割,实现了MC4R基因的大片段删除,并且获得了大片段删除的敲除猪个体,为研究猪MC4R基因提供了一种切实可行的方法。
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公开(公告)号:CN105821049A
公开(公告)日:2016-08-03
申请号:CN201610285534.2
申请日:2016-04-29
Applicant: 中国农业大学
IPC: C12N15/12 , C12N15/113 , C12N15/85 , C12N15/873 , A01K67/027
CPC classification number: C12N15/113 , A01K67/0276 , A01K2207/10 , A01K2217/075 , A01K2227/108 , A01K2267/03 , C07K14/47 , C12N15/8509 , C12N15/8778 , C12N2310/10 , C12N2800/107 , C12N2800/80 , C12N2810/10
Abstract: 本发明提供了一种Fbxo40基因敲除猪的制备方法。本发明将CRISPR/Cas9打靶载体及PGK?Neo抗性基因共同转染猪胎儿成纤维细胞,获得G418抗性的阳性单克隆细胞,阳性单克隆细胞中的Fbxo40基因发生插入/缺失突变、且读码框产生移码并提前终止,将这样的细胞克隆作为核移植的供体细胞,以卵母细胞作为核移植的受体卵母细胞,通过体细胞核移植技术获得克隆胚胎,将优质的克隆胚胎移植到发情母猪输卵管内,通过全期发育并获得Fbxo40基因敲除的克隆猪。本发明利用CRISPR/Cas9的基因编辑技术,低成本、高效率地获得了Fbxo40敲除猪,为研究肌肉发育及肌肉相关疾病提供了动物模型。
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公开(公告)号:CN104830752A
公开(公告)日:2015-08-12
申请号:CN201510098217.5
申请日:2015-03-05
Applicant: 中国农业大学
Abstract: 本发明涉及细胞培养技术领域,特别涉及一种猪胎儿成纤维细胞的单细胞培养方法。该单细胞培养方法,包括:步骤A:获得成纤维细胞悬液和饲养层细胞;步骤B:将饲养层细胞以微滴形式接种至培养皿,培养至饲养层细胞密度在微滴内100%汇合,获得饲养层细胞微滴;步骤C:将成纤维细胞悬液接种至具有饲养层细胞微滴的培养皿,经细胞培养,获得单细胞克隆。本发明提供的单细胞培养方法获得的克隆细胞基因组完全一致,有利于提高转基因猪的特异性,有利于转基因猪克隆效率的评价,以及特定均一转基因猪品系的建立。
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