乳腺特异性表达PEDV单链抗体基因的同源重组载体及应用

    公开(公告)号:CN110684799A

    公开(公告)日:2020-01-14

    申请号:CN201910953813.5

    申请日:2019-10-09

    Abstract: 本发明提供一种乳腺特异性表达PEDV单链抗体基因的同源重组载体及应用。所述同源重组载体是以真核表达载体为骨架载体,同源重组载体中至少包括正筛选元件、负筛选标记基因、PEDV单链抗体基因表达盒以及rosa26基因的同源左臂和同源右臂;其中,正筛选元件包括顺次连接的重组酶识别序列-正筛选标记基因-重组酶基因-重组酶识别序列。利用所述同源重组载体转染哺乳动物体细胞,获得的阳性细胞rosa26基因第一个内含子定点整合PEDV单链抗体基因。利用本发明方法成功获得了乳腺特异性表达PEDV单链抗体的转基因猪细胞系,为通过转基因技术制备抗腹泻转基因猪奠定基础。

    CD28基因过表达载体及其应用

    公开(公告)号:CN105112449B

    公开(公告)日:2018-02-06

    申请号:CN201510557737.8

    申请日:2015-09-02

    Abstract: 本发明提供一种CD28基因过表达载体及其应用,所述过表达载体是以目标生物基因组为模板,PCR扩增ROSA26基因第一内含子的左、右同源臂,CD28基因表达框,OCT4基因启动子,然后将同源左臂,CD28基因表达框,含LoxP位点的OCT4基因启动子调控的Cre表达框和Neo基因表达框,同源右臂以及负筛选标记DTA依次连接,并构建到真核表达载体上得到。将该载体与含特异性靶向猪ROSA26基因第一内含子的CRISPR/Cas9打靶载体共转入猪胎儿成纤维细胞中,以阳性细胞为供体细胞,卵母细胞为受体细胞,通过体细胞核移植技术获得克隆胚胎;将克隆胚胎移入猪子宫内妊娠获得在ROSA26基因第一内含子定点整合有CD28基因且自动敲除标记基因的转基因猪。

    一种MC3R基因敲除猪的制备方法

    公开(公告)号:CN106191113A

    公开(公告)日:2016-12-07

    申请号:CN201610614586.X

    申请日:2016-07-29

    Abstract: 本发明公开了一种MC3R基因敲除猪的制备方法。本发明公开的MC3R基因敲除猪的制备方法采用CRISPR/Cas9系统进行,CRISPR/Cas9系统中包含gRNA1的编码基因和gRNA2的编码基因,gRNA1识别MC3R基因的靶序列为序列表中序列1;所述gRNA2识别MC3R基因的靶序列为序列表中序列2。实验证明,利用本发明的MC3R基因敲除猪的制备方法敲除MC3R基因的效率达到29.16%,并且本发明的方法能够快速高效的将目的基因大片段敲除,并且不留下外源基因片段,不仅可以用来研究MC3R基因的作用机制和机理,还可以用于动物育种。

    一种猪胎儿成纤维细胞的单细胞培养方法

    公开(公告)号:CN104830752A

    公开(公告)日:2015-08-12

    申请号:CN201510098217.5

    申请日:2015-03-05

    Abstract: 本发明涉及细胞培养技术领域,特别涉及一种猪胎儿成纤维细胞的单细胞培养方法。该单细胞培养方法,包括:步骤A:获得成纤维细胞悬液和饲养层细胞;步骤B:将饲养层细胞以微滴形式接种至培养皿,培养至饲养层细胞密度在微滴内100%汇合,获得饲养层细胞微滴;步骤C:将成纤维细胞悬液接种至具有饲养层细胞微滴的培养皿,经细胞培养,获得单细胞克隆。本发明提供的单细胞培养方法获得的克隆细胞基因组完全一致,有利于提高转基因猪的特异性,有利于转基因猪克隆效率的评价,以及特定均一转基因猪品系的建立。

Patent Agency Ranking