公开(公告)号：CN114836418B

公开(公告)日：2024-07-12

申请号：CN202110145282.4

申请日：2021-02-02

申请人： 中国农业大学

发明人： 胡晓湘 ,  赵成成 ,  兰欣悦 ,  李果 ,  连迪 ,  李宁

IPC分类号： C12N15/113 ,  C12N15/85 ,  C12N9/22

摘要： 本发明提供一种用于敲降猪流行性腹泻病毒的CRISPR‑Cas13d系统。本发明利用mCherry荧光报告基因，将PEDV病毒ORF3、E、M和N四个表达阅读框序列分别融合到mCherry基因的C端，构建筛选靶向PEDV表达阅读框的sgRNA高效作用靶点的荧光报告系统，利用CRISPR‑Cas13d高效切割mRNA的特性，进行高效率sgRNAs的快速筛选。然后利用筛选出的高效靶向结合的sgRNAs进行CRISPR‑Cas13d系统对靶病毒的高效降解。本发明提供的RNA病毒敲降方法具有高效率、高精准率及低脱靶率的优势。

公开(公告)号：CN114836418A

公开(公告)日：2022-08-02

申请号：CN202110145282.4

申请日：2021-02-02

申请人： 中国农业大学

发明人： 胡晓湘 ,  赵成成 ,  兰欣悦 ,  李果 ,  连迪 ,  李宁

IPC分类号： C12N15/113 ,  C12N15/85 ,  C12N9/22

摘要： 本发明提供一种用于敲降猪流行性腹泻病毒的CRISPR‑Cas13d系统。本发明利用mCherry荧光报告基因，将PEDV病毒ORF3、E、M和N四个表达阅读框序列分别融合到mCherry基因的C端，构建筛选靶向PEDV表达阅读框的sgRNA高效作用靶点的荧光报告系统，利用CRISPR‑Cas13d高效切割mRNA的特性，进行高效率sgRNAs的快速筛选。然后利用筛选出的高效靶向结合的sgRNAs进行CRISPR‑Cas13d系统对靶病毒的高效降解。本发明提供的RNA病毒敲降方法具有高效率、高精准率及低脱靶率的优势。