公开(公告)号：CN116536355B

公开(公告)日：2023-10-20

申请号：CN202310345354.9

申请日：2023-03-31

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 孙怡朋 ,  吴专丽 ,  胡晓湘 ,  张然 ,  马晓溦 ,  赵成成

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/113 ,  C12N9/22 ,  A61K48/00 ,  A61P31/16 ,  A61K38/46

Abstract: 本发明属于生物技术领域，公开了一种广谱靶向多种亚型流感病毒的crRNA转录载体，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。该crRNA转录载体可经体外转录得到CRISPR‑Cas13d的crRNA，其和Cas13d mRNA配合，可达到广谱抗流感病毒的效果；具体来说，经设计的CRISPR‑Cas13d系统可以同时靶向流感病毒PA、NP、M基因，多靶点组合可以有效阻止流感病毒发生耐药突变；本发明还公开了一种CRISPR/Cas13d系统在RNA水平的RNA投送体系和应用；该RNA投送体系特别适用于本发明的CRISPR/Cas13d体系，其RNA搭载浓度高、包覆效果好、靶向性优异，具有极佳的溶酶体逃逸能力。

公开(公告)号：CN116536355A

公开(公告)日：2023-08-04

申请号：CN202310345354.9

申请日：2023-03-31

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 孙怡朋 ,  吴专丽 ,  胡晓湘 ,  张然 ,  马晓溦 ,  赵成成

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/113 ,  C12N9/22 ,  A61K48/00 ,  A61P31/16 ,  A61K38/46

Abstract: 本发明属于生物技术领域，公开了一种广谱靶向多种亚型流感病毒的crRNA转录载体，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。该crRNA转录载体可经体外转录得到CRISPR‑Cas13d的crRNA，其和Cas13d mRNA配合，可达到广谱抗流感病毒的效果；具体来说，经设计的CRISPR‑Cas13d系统可以同时靶向流感病毒PA、NP、M基因，多靶点组合可以有效阻止流感病毒发生耐药突变；本发明还公开了一种CRISPR/Cas13d系统在RNA水平的RNA投送体系和应用；该RNA投送体系特别适用于本发明的CRISPR/Cas13d体系，其RNA搭载浓度高、包覆效果好、靶向性优异，具有极佳的溶酶体逃逸能力。

公开(公告)号：CN114836418A

公开(公告)日：2022-08-02

申请号：CN202110145282.4

申请日：2021-02-02

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 胡晓湘 ,  赵成成 ,  兰欣悦 ,  李果 ,  连迪 ,  李宁

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/85 ,  C12N9/22

Abstract: 本发明提供一种用于敲降猪流行性腹泻病毒的CRISPR‑Cas13d系统。本发明利用mCherry荧光报告基因，将PEDV病毒ORF3、E、M和N四个表达阅读框序列分别融合到mCherry基因的C端，构建筛选靶向PEDV表达阅读框的sgRNA高效作用靶点的荧光报告系统，利用CRISPR‑Cas13d高效切割mRNA的特性，进行高效率sgRNAs的快速筛选。然后利用筛选出的高效靶向结合的sgRNAs进行CRISPR‑Cas13d系统对靶病毒的高效降解。本发明提供的RNA病毒敲降方法具有高效率、高精准率及低脱靶率的优势。

公开(公告)号：CN114836418B

公开(公告)日：2024-07-12

申请号：CN202110145282.4

申请日：2021-02-02

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 胡晓湘 ,  赵成成 ,  兰欣悦 ,  李果 ,  连迪 ,  李宁

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/85 ,  C12N9/22

Abstract: 本发明提供一种用于敲降猪流行性腹泻病毒的CRISPR‑Cas13d系统。本发明利用mCherry荧光报告基因，将PEDV病毒ORF3、E、M和N四个表达阅读框序列分别融合到mCherry基因的C端，构建筛选靶向PEDV表达阅读框的sgRNA高效作用靶点的荧光报告系统，利用CRISPR‑Cas13d高效切割mRNA的特性，进行高效率sgRNAs的快速筛选。然后利用筛选出的高效靶向结合的sgRNAs进行CRISPR‑Cas13d系统对靶病毒的高效降解。本发明提供的RNA病毒敲降方法具有高效率、高精准率及低脱靶率的优势。

公开(公告)号：CN116617414B

公开(公告)日：2024-04-05

申请号：CN202310345367.6

申请日：2023-03-31

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 孙怡朋 ,  吴专丽 ,  马晓溦 ,  胡晓湘 ,  张然 ,  赵成成

IPC: A61K48/00 ,  A61K31/05 ,  A61K9/127 ,  A61K47/24 ,  A61K47/28 ,  A61K47/42 ,  A61P31/16 ,  B82Y5/00 ,  B82Y40/00

Abstract: 本发明属于生物技术领域，公开了一种脂质体，所述脂质体内包覆有Cas13d mRNA、crRNA、厚朴酚；所述Cas13d mRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；crRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.81所示。该脂质体包覆有Cas13d mRNA、crRNA、厚朴酚，具有良好的抗病毒效果和广谱性；同时本发明还公开了该脂质体的应用以及制备方法。

公开(公告)号：CN116617414A

公开(公告)日：2023-08-22

申请号：CN202310345367.6

申请日：2023-03-31

Applicant: 中国农业大学

Inventor： 孙怡朋 ,  吴专丽 ,  马晓溦 ,  胡晓湘 ,  张然 ,  赵成成

IPC: A61K48/00 ,  A61K31/05 ,  A61K9/127 ,  A61K47/24 ,  A61K47/28 ,  A61K47/42 ,  A61P31/16 ,  B82Y5/00 ,  B82Y40/00

Abstract: 本发明属于生物技术领域，公开了一种脂质体，所述脂质体内包覆有Cas13d mRNA、crRNA、厚朴酚；所述Cas13d mRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；crRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.81所示。该脂质体包覆有Cas13d mRNA、crRNA、厚朴酚，具有良好的抗病毒效果和广谱性；同时本发明还公开了该脂质体的应用以及制备方法。