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公开(公告)号：CN111087460A
公开(公告)日：2020-05-01
申请号：CN202010037156.2
申请日：2020-01-14
摘要： 本发明公开了一种广谱型抗菌肽及其应用，属于医药技术领域。所述的抗菌肽，命名为26M，其含有18个氨基酸残基，分子量2475.16道尔顿，等电点12.03，其氨基酸序列为SEQ ID NO:1所示。实验证明，该抗菌肽具有显著抑制多种病原菌生长和繁殖的作用，所述的病原菌包括大肠埃希菌、沙门菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌、猪链球菌、金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和耐万古霉素屎肠球菌。本发明提供的一种新型的具有广谱抗菌作用的抗菌肽，能够替代传统抗生素，且不易产生耐药性，在对抗病原菌引起的感染性疾病中将具有很好的应用前景。
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公开(公告)号：CN117187421A
公开(公告)日：2023-12-08
申请号：CN202311199564.8
申请日：2023-09-17
IPC分类号： C12Q1/689 , C12Q1/6844 , C12N15/11 , C12R1/46
摘要： 本发明公开了一种用于猪链球菌2型和1/2型、1型和14型快速分型的试剂盒及其应用。本发明发明人根据cpsK 483位点单核苷酸差异，筛选出特异性crRNA，使用RPA代替传统PCR扩增，摆脱了对仪器的束缚实现恒温快速扩增，又通过血红素/G‑四链体DNA酶可视化系统，通过颜色的变化就可明显区分开血清1型和14型、2型和1/2型，操作简单，无需特殊仪器和专业人员，全程90分钟内就可实现血清分型，为临床样品的现场检测提供可行性方案。血清型2和1/2、1和14之间的可靠区分有助于对流行猪链球菌菌株进行分类，并有助于在疾病暴发时对菌株进行追踪，具有重要的公共卫生学意义。
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公开(公告)号：CN115161333A
公开(公告)日：2022-10-11
申请号：CN202210724417.7
申请日：2022-06-23
摘要： 本发明公开了一种猪链球菌的反向筛选标记、含有该反向筛选标记的猪链球菌及其应用。所述的反向筛选标记为突变后的编码猪链球菌苯丙氨酸tRNA合成酶α亚基的pheS基因，突变后的pheS基因导致了编码的猪链球菌苯丙氨酸tRNA合成酶α亚基发生了T261S和A315G双取代突变，PheS突变体通过与菌株自身的野生PheS蛋白竞争，翻译过程中将p‑Cl‑Phe错误地掺入到合成的蛋白质中，从而在p‑Cl‑Phe存在条件下，表达PheS突变体的菌株死亡，不表达PheS突变体的菌株生存。利用这一高效反向筛选标记，本发明还建立了高效的猪链球菌无痕基因操作方法，用于实现猪链球菌的无痕基因缺失、基因融合和基因突变等无痕基因操作，在研究猪链球菌生理和病理机制、制备疫苗株方面具有很好的应用前景。
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公开(公告)号：CN113621717A
公开(公告)日：2021-11-09
申请号：CN202110863649.6
申请日：2021-07-29
IPC分类号： C12Q1/689 , C12Q1/6844 , C12Q1/04 , C12R1/46
摘要： 本发明公开了一种基于CRISPR‑Cas12a的猪链球菌快速可视化RPA检测试剂盒及其应用。所述试剂盒中包含一对用于扩增猪链球菌cps2j基因的特异性引物对、gRNA和荧光报告探针，其中，所述的引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO:6和7或SEQ ID NO:8和9所示，与所述的gRNA互补的DNA的核苷酸序列如SEQ ID NO:2或3所示。本发明根据猪链球菌的特异性基因Cps2j设计特异性重组酶聚合酶扩增(RPA)引物及CRISPR/Cas12a系统探针，实现了RPA特异性靶基因扩增，以及CRISPR/Cas12a系统对报告基因的切割，建立了猪链球菌的快速可视化检测方法。该方法快速，可视，且特异性好，敏感度高，特别适用于资源贫乏地区猪链球菌的检测。
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公开(公告)号：CN115161333B
公开(公告)日：2023-08-25
申请号：CN202210724417.7
申请日：2022-06-23
摘要： 本发明公开了一种猪链球菌的反向筛选标记、含有该反向筛选标记的猪链球菌及其应用。所述的反向筛选标记为突变后的编码猪链球菌苯丙氨酸tRNA合成酶α亚基的pheS基因，突变后的pheS基因导致了编码的猪链球菌苯丙氨酸tRNA合成酶α亚基发生了T261S和A315G双取代突变，PheS突变体通过与菌株自身的野生PheS蛋白竞争，翻译过程中将p‑Cl‑Phe错误地掺入到合成的蛋白质中，从而在p‑Cl‑Phe存在条件下，表达PheS突变体的菌株死亡，不表达PheS突变体的菌株生存。利用这一高效反向筛选标记，本发明还建立了高效的猪链球菌无痕基因操作方法，用于实现猪链球菌的无痕基因缺失、基因融合和基因突变等无痕基因操作，在研究猪链球菌生理和病理机制、制备疫苗株方面具有很好的应用前景。
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公开(公告)号：CN114686608A
公开(公告)日：2022-07-01
申请号：CN202011643292.2
申请日：2020-12-30
IPC分类号： C12Q1/689 , C12Q1/6844 , C12Q1/04 , C12N15/11 , C12R1/01
摘要： 本发明涉及基于CRISPR‑Cas12a的胸膜肺炎放线杆菌快速可视化检测方法。具体涉及试剂盒，其包含一对针对apxIV的特异性引物对SEQ ID NO：14和15、16和17、18和19、20和21，或26和27(优选SEQ ID NO：26和27)，以及针对上述引物扩增的产物的序列为SEQ ID NO：3、5、6或8(优选SEQ ID NO：8)的gRNA，其用于快速可视化检测胸膜肺炎放线杆菌。本发明基于RPA及CRISPR/Cas12a系统的检测方法，利用Cas12a蛋白，根据App的特异性基因apxIV设计特异性重组酶聚合酶扩增(RPA)引物及CRISPR/Cas12a系统探针，以实现RPA特异性靶基因扩增，以及CRISPR/Cas12a系统对报告基因的切割，建立可用于检测猪胸膜肺炎放线杆菌的方法，并对RPA体系和CRISPR/Cas12a反应体系进行优化。该方法快速，可视，且特异性好，敏感度高，可用于临床检测。
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公开(公告)号：CN111087460B
公开(公告)日：2021-07-30
申请号：CN202010037156.2
申请日：2020-01-14
摘要： 本发明公开了一种广谱型抗菌肽及其应用，属于医药技术领域。所述的抗菌肽，命名为26M，其含有18个氨基酸残基，分子量2475.16道尔顿，等电点12.03，其氨基酸序列为SEQ ID NO:1所示。实验证明，该抗菌肽具有显著抑制多种病原菌生长和繁殖的作用，所述的病原菌包括大肠埃希菌、沙门菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌、猪链球菌、金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和耐万古霉素屎肠球菌。本发明提供的一种新型的具有广谱抗菌作用的抗菌肽，能够替代传统抗生素，且不易产生耐药性，在对抗病原菌引起的感染性疾病中将具有很好的应用前景。
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