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公开(公告)号：CN117187421A
公开(公告)日：2023-12-08
申请号：CN202311199564.8
申请日：2023-09-17
IPC分类号： C12Q1/689 , C12Q1/6844 , C12N15/11 , C12R1/46
摘要： 本发明公开了一种用于猪链球菌2型和1/2型、1型和14型快速分型的试剂盒及其应用。本发明发明人根据cpsK 483位点单核苷酸差异，筛选出特异性crRNA，使用RPA代替传统PCR扩增，摆脱了对仪器的束缚实现恒温快速扩增，又通过血红素/G‑四链体DNA酶可视化系统，通过颜色的变化就可明显区分开血清1型和14型、2型和1/2型，操作简单，无需特殊仪器和专业人员，全程90分钟内就可实现血清分型，为临床样品的现场检测提供可行性方案。血清型2和1/2、1和14之间的可靠区分有助于对流行猪链球菌菌株进行分类，并有助于在疾病暴发时对菌株进行追踪，具有重要的公共卫生学意义。
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公开(公告)号：CN115161333A
公开(公告)日：2022-10-11
申请号：CN202210724417.7
申请日：2022-06-23
摘要： 本发明公开了一种猪链球菌的反向筛选标记、含有该反向筛选标记的猪链球菌及其应用。所述的反向筛选标记为突变后的编码猪链球菌苯丙氨酸tRNA合成酶α亚基的pheS基因，突变后的pheS基因导致了编码的猪链球菌苯丙氨酸tRNA合成酶α亚基发生了T261S和A315G双取代突变，PheS突变体通过与菌株自身的野生PheS蛋白竞争，翻译过程中将p‑Cl‑Phe错误地掺入到合成的蛋白质中，从而在p‑Cl‑Phe存在条件下，表达PheS突变体的菌株死亡，不表达PheS突变体的菌株生存。利用这一高效反向筛选标记，本发明还建立了高效的猪链球菌无痕基因操作方法，用于实现猪链球菌的无痕基因缺失、基因融合和基因突变等无痕基因操作，在研究猪链球菌生理和病理机制、制备疫苗株方面具有很好的应用前景。
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公开(公告)号：CN113350495A
公开(公告)日：2021-09-07
申请号：CN202110246641.5
申请日：2021-03-05
IPC分类号： A61K39/116 , A61K39/09 , A61K39/102 , A61K39/39 , A61P11/00 , A61P31/04 , C12N15/62 , C12N15/70 , C07K19/00
摘要： 本发明公开了一种猪链球菌病‑副猪嗜血杆菌病‑猪传染性胸膜肺炎三联亚单位疫苗及其制备方法。本发明三联亚单位疫苗含有猪链球菌抗原蛋白MRP、SLY和EF，副猪嗜血杆菌抗原蛋白AfuA、OppA2、CdtB、OppA，以及胸膜肺炎放线杆菌抗原蛋白ApxI、ApxII和OMP。实验证明，该疫苗能激发小鼠的强烈的免疫反应，对不同血清型的猪链球菌、副猪嗜血杆菌和胸膜肺炎放线杆菌攻毒小鼠均具有良好的交叉保护效果，充分说明本发明中制备的三联亚单位疫苗具有良好的保护效果。因此，本发明的提出为研制高效、广谱、廉价的猪链球菌病‑副猪嗜血杆菌病‑猪传染性胸膜肺炎疫苗奠定了坚实的基础，为猪链球菌病、副猪嗜血杆菌病以及猪传染性胸膜肺炎的防治提供了有效的技术手段。
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公开(公告)号：CN110229234A
公开(公告)日：2019-09-13
申请号：CN201910485284.0
申请日：2019-06-05
摘要： 本发明涉及具有免疫保护性的副猪嗜血杆菌融合蛋白CdtB-OppA。经实验融合蛋白CdtB-OppA免疫组的保护率为90％，要高于纯化蛋白CdtB+OppA免疫组的保护率80％。通过融合蛋白的形式，不仅有利于减少生产时的工艺复杂度和降低成本，并且免疫效果更好，可以单独或与其他蛋白一起作为联合疫苗。
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公开(公告)号：CN115161333B
公开(公告)日：2023-08-25
申请号：CN202210724417.7
申请日：2022-06-23
摘要： 本发明公开了一种猪链球菌的反向筛选标记、含有该反向筛选标记的猪链球菌及其应用。所述的反向筛选标记为突变后的编码猪链球菌苯丙氨酸tRNA合成酶α亚基的pheS基因，突变后的pheS基因导致了编码的猪链球菌苯丙氨酸tRNA合成酶α亚基发生了T261S和A315G双取代突变，PheS突变体通过与菌株自身的野生PheS蛋白竞争，翻译过程中将p‑Cl‑Phe错误地掺入到合成的蛋白质中，从而在p‑Cl‑Phe存在条件下，表达PheS突变体的菌株死亡，不表达PheS突变体的菌株生存。利用这一高效反向筛选标记，本发明还建立了高效的猪链球菌无痕基因操作方法，用于实现猪链球菌的无痕基因缺失、基因融合和基因突变等无痕基因操作，在研究猪链球菌生理和病理机制、制备疫苗株方面具有很好的应用前景。
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公开(公告)号：CN110229234B
公开(公告)日：2022-09-27
申请号：CN201910485284.0
申请日：2019-06-05
摘要： 本发明涉及具有免疫保护性的副猪嗜血杆菌融合蛋白CdtB‑OppA。经实验融合蛋白CdtB‑OppA免疫组的保护率为90％，要高于纯化蛋白CdtB+OppA免疫组的保护率80％。通过融合蛋白的形式，不仅有利于减少生产时的工艺复杂度和降低成本，并且免疫效果更好，可以单独或与其他蛋白一起作为联合疫苗。
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公开(公告)号：CN114686608A
公开(公告)日：2022-07-01
申请号：CN202011643292.2
申请日：2020-12-30
IPC分类号： C12Q1/689 , C12Q1/6844 , C12Q1/04 , C12N15/11 , C12R1/01
摘要： 本发明涉及基于CRISPR‑Cas12a的胸膜肺炎放线杆菌快速可视化检测方法。具体涉及试剂盒，其包含一对针对apxIV的特异性引物对SEQ ID NO：14和15、16和17、18和19、20和21，或26和27(优选SEQ ID NO：26和27)，以及针对上述引物扩增的产物的序列为SEQ ID NO：3、5、6或8(优选SEQ ID NO：8)的gRNA，其用于快速可视化检测胸膜肺炎放线杆菌。本发明基于RPA及CRISPR/Cas12a系统的检测方法，利用Cas12a蛋白，根据App的特异性基因apxIV设计特异性重组酶聚合酶扩增(RPA)引物及CRISPR/Cas12a系统探针，以实现RPA特异性靶基因扩增，以及CRISPR/Cas12a系统对报告基因的切割，建立可用于检测猪胸膜肺炎放线杆菌的方法，并对RPA体系和CRISPR/Cas12a反应体系进行优化。该方法快速，可视，且特异性好，敏感度高，可用于临床检测。
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公开(公告)号：CN108410785A
公开(公告)日：2018-08-17
申请号：CN201810139232.3
申请日：2018-02-09
CPC分类号： C12N15/70 , A61K39/12 , A61P31/20 , C12N2750/10022 , C12N2750/10034
摘要： 本发明涉及一种制备细菌菌影以及基因工程亚单位疫苗的方法，包括将INP信号序列和外源基因以及裂解盒基因E-lysis克隆到同一个表达载体，转化细菌，其中INP的信号序列为SEQ ID NO：1表示的序列，裂解盒基因E-lysis的序列为SEQ ID NO：2表示的序列，以及表达外源基因的重组细菌菌影在制备疫苗中的应用。
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公开(公告)号：CN113621717A
公开(公告)日：2021-11-09
申请号：CN202110863649.6
申请日：2021-07-29
IPC分类号： C12Q1/689 , C12Q1/6844 , C12Q1/04 , C12R1/46
摘要： 本发明公开了一种基于CRISPR‑Cas12a的猪链球菌快速可视化RPA检测试剂盒及其应用。所述试剂盒中包含一对用于扩增猪链球菌cps2j基因的特异性引物对、gRNA和荧光报告探针，其中，所述的引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO:6和7或SEQ ID NO:8和9所示，与所述的gRNA互补的DNA的核苷酸序列如SEQ ID NO:2或3所示。本发明根据猪链球菌的特异性基因Cps2j设计特异性重组酶聚合酶扩增(RPA)引物及CRISPR/Cas12a系统探针，实现了RPA特异性靶基因扩增，以及CRISPR/Cas12a系统对报告基因的切割，建立了猪链球菌的快速可视化检测方法。该方法快速，可视，且特异性好，敏感度高，特别适用于资源贫乏地区猪链球菌的检测。
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公开(公告)号：CN108410785B
公开(公告)日：2021-11-02
申请号：CN201810139232.3
申请日：2018-02-09
摘要： 本发明涉及一种制备细菌菌影以及基因工程亚单位疫苗的方法，包括将INP信号序列和外源基因以及裂解盒基因E‑lysis克隆到同一个表达载体，转化细菌，其中INP的信号序列为SEQ ID NO：1表示的序列，裂解盒基因E‑lysis的序列为SEQ ID NO：2表示的序列，以及表达外源基因的重组细菌菌影在制备疫苗中的应用。
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