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公开(公告)号：CN113621717A
公开(公告)日：2021-11-09
申请号：CN202110863649.6
申请日：2021-07-29
IPC分类号： C12Q1/689 , C12Q1/6844 , C12Q1/04 , C12R1/46
摘要： 本发明公开了一种基于CRISPR‑Cas12a的猪链球菌快速可视化RPA检测试剂盒及其应用。所述试剂盒中包含一对用于扩增猪链球菌cps2j基因的特异性引物对、gRNA和荧光报告探针，其中，所述的引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO:6和7或SEQ ID NO:8和9所示，与所述的gRNA互补的DNA的核苷酸序列如SEQ ID NO:2或3所示。本发明根据猪链球菌的特异性基因Cps2j设计特异性重组酶聚合酶扩增(RPA)引物及CRISPR/Cas12a系统探针，实现了RPA特异性靶基因扩增，以及CRISPR/Cas12a系统对报告基因的切割，建立了猪链球菌的快速可视化检测方法。该方法快速，可视，且特异性好，敏感度高，特别适用于资源贫乏地区猪链球菌的检测。
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公开(公告)号：CN108410785B
公开(公告)日：2021-11-02
申请号：CN201810139232.3
申请日：2018-02-09
摘要： 本发明涉及一种制备细菌菌影以及基因工程亚单位疫苗的方法，包括将INP信号序列和外源基因以及裂解盒基因E‑lysis克隆到同一个表达载体，转化细菌，其中INP的信号序列为SEQ ID NO：1表示的序列，裂解盒基因E‑lysis的序列为SEQ ID NO：2表示的序列，以及表达外源基因的重组细菌菌影在制备疫苗中的应用。
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公开(公告)号：CN113528682A
公开(公告)日：2021-10-22
申请号：CN202110731289.4
申请日：2021-06-29
IPC分类号： C12Q1/689 , C12Q1/6851 , C12Q1/06 , C12N15/11 , C12R1/32
摘要： 本发明公开了一种同时检测三种分枝杆菌的多重TaqMan荧光定量PCR试剂盒及其应用。所述的三种分枝杆菌包括结核分枝杆菌复合群(MTBC)、禽分枝杆菌副结核亚种(MAP)和禽分枝杆菌禽亚种(MAA)。所述的试剂盒中含有分别用于检测MTBC、MAP和MAA的引物以及探针。进一步的，本发明还建立了使用上述试剂盒检测三种分枝杆菌的多重TaqMan荧光定量PCR方法，实验证明，本发明建立的多重TaqMan荧光定量方法与常规PCR的阳性符合率为100.0％(175/175)、阴性符合率为87.0％(220/253)，与分枝杆菌培养的阳性符合率为100.0％(116/116)、阴性符合率为69.6％(220/316)。因此，本发明所建立的多重TaqMan荧光定量方法可用于MTBC、MAP和MAA的定性和定量检测，为有效防控牛结核病和副结核病提供了新的技术手段。
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公开(公告)号：CN113462712A
公开(公告)日：2021-10-01
申请号：CN202110796924.7
申请日：2021-07-14
摘要： 本发明公开了一种温控自剪切单质粒同源重组系统及其在基因编辑中的应用。所述的系统包括用于进行基因编辑的单质粒pKID220，所述的pKID220质粒中含有温控元件、Red重组酶基因、I‑SceI核酸内切酶基因和含有筛选标记的打靶片段区，其中，所述的筛选标记的两侧均带有I‑SceI识别位点和FRT位点。实验证明，本发明的同源重组系统的重组效率优于传统λ‑Red系统的双质粒和阿拉伯糖诱导方法，无需任何化学诱导剂，仅通过改变培养温度，即可实现染色体的高效编辑。而且避免了多次电穿孔过程，极大降低了操作复杂度并节省了时间和成本。本发明的提出为基因编辑提供了一种更加快速、简便、经济的技术手段。
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公开(公告)号：CN110240657A
公开(公告)日：2019-09-17
申请号：CN201910485285.5
申请日：2019-06-05
IPC分类号： C07K19/00 , C12N15/62 , C12N15/70 , A61K39/102 , A61P31/04
摘要： 本发明涉及具有免疫保护性的副猪嗜血杆菌融合蛋白AfuA-OppA2以及以其作为有效成分的疫苗。经实验表明，融合蛋白AfuA-OppA2免疫组的保护率为80％，纯化蛋白AfuA和OppA2混合免疫组的保护率为70％。通过融合蛋白的形式，不仅有利于减少生产时的工艺复杂度和降低成本，并且免疫效果更好，可以单独作为疫苗或与其他蛋白一起作为联合疫苗。
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公开(公告)号：CN115161333B
公开(公告)日：2023-08-25
申请号：CN202210724417.7
申请日：2022-06-23
摘要： 本发明公开了一种猪链球菌的反向筛选标记、含有该反向筛选标记的猪链球菌及其应用。所述的反向筛选标记为突变后的编码猪链球菌苯丙氨酸tRNA合成酶α亚基的pheS基因，突变后的pheS基因导致了编码的猪链球菌苯丙氨酸tRNA合成酶α亚基发生了T261S和A315G双取代突变，PheS突变体通过与菌株自身的野生PheS蛋白竞争，翻译过程中将p‑Cl‑Phe错误地掺入到合成的蛋白质中，从而在p‑Cl‑Phe存在条件下，表达PheS突变体的菌株死亡，不表达PheS突变体的菌株生存。利用这一高效反向筛选标记，本发明还建立了高效的猪链球菌无痕基因操作方法，用于实现猪链球菌的无痕基因缺失、基因融合和基因突变等无痕基因操作，在研究猪链球菌生理和病理机制、制备疫苗株方面具有很好的应用前景。
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公开(公告)号：CN115779067A
公开(公告)日：2023-03-14
申请号：CN202211359485.4
申请日：2022-11-02
IPC分类号： A61K38/12 , A61P31/04 , A61K31/192
摘要： 本发明公开了木豆芪酸（CSA）与多粘菌素B联合在抑制mcr‑1阳性大肠杆菌生长中的应用。抗生素的过度使用造成了典型“超级细菌”的传播和流行，导致几乎所有的抗生素都对其无效，因此细菌耐药性已经成为人类公共卫生安全的重要问题之一。本发明从天然产物中筛选并鉴定出多粘菌素耐药关键蛋白MCR‑1的小分子抑制剂木豆芪酸，研究发现，CSA与多粘菌素B联合治疗mcr‑1阳性大肠杆菌产生了显著的协同效果，CSA可能降低了mcr‑1阳性菌对多粘菌素B的耐药性，进而增强了多粘菌素B的抗菌活性。本发明的提出为深入研究和开发更高活性的MCR‑1抑制剂提供思路，为与大肠杆菌感染导致的相关疾病的治疗提供了一种新的技术手段。
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公开(公告)号：CN110229234B
公开(公告)日：2022-09-27
申请号：CN201910485284.0
申请日：2019-06-05
摘要： 本发明涉及具有免疫保护性的副猪嗜血杆菌融合蛋白CdtB‑OppA。经实验融合蛋白CdtB‑OppA免疫组的保护率为90％，要高于纯化蛋白CdtB+OppA免疫组的保护率80％。通过融合蛋白的形式，不仅有利于减少生产时的工艺复杂度和降低成本，并且免疫效果更好，可以单独或与其他蛋白一起作为联合疫苗。
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公开(公告)号：CN114686608A
公开(公告)日：2022-07-01
申请号：CN202011643292.2
申请日：2020-12-30
IPC分类号： C12Q1/689 , C12Q1/6844 , C12Q1/04 , C12N15/11 , C12R1/01
摘要： 本发明涉及基于CRISPR‑Cas12a的胸膜肺炎放线杆菌快速可视化检测方法。具体涉及试剂盒，其包含一对针对apxIV的特异性引物对SEQ ID NO：14和15、16和17、18和19、20和21，或26和27(优选SEQ ID NO：26和27)，以及针对上述引物扩增的产物的序列为SEQ ID NO：3、5、6或8(优选SEQ ID NO：8)的gRNA，其用于快速可视化检测胸膜肺炎放线杆菌。本发明基于RPA及CRISPR/Cas12a系统的检测方法，利用Cas12a蛋白，根据App的特异性基因apxIV设计特异性重组酶聚合酶扩增(RPA)引物及CRISPR/Cas12a系统探针，以实现RPA特异性靶基因扩增，以及CRISPR/Cas12a系统对报告基因的切割，建立可用于检测猪胸膜肺炎放线杆菌的方法，并对RPA体系和CRISPR/Cas12a反应体系进行优化。该方法快速，可视，且特异性好，敏感度高，可用于临床检测。
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公开(公告)号：CN113995740A
公开(公告)日：2022-02-01
申请号：CN202111412497.4
申请日：2021-11-25
IPC分类号： A61K31/122 , A61K31/407 , A61P31/04
摘要： 本发明公开了紫草素作为碳青霉烯类抗生素的增效剂在抗碳青霉烯类耐药菌中的应用。本发明采用药敏实验和联合药敏实验从20种中药单体中筛选出了美罗培南的增效剂‑紫草素，实验证明，紫草素与美罗培南联合应用时能对碳青霉烯类耐药菌起到良好的杀菌效果。特别是对携带碳青霉烯类耐药基因blaIMP‑4、blaNDM‑1、blaVIM‑1及/或blaOXA‑23基因的肠杆菌科细菌能够产生协同抑制作用。本发明的提出为碳青霉烯耐药菌的防控提供了新的技术手段。
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