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公开(公告)号：CN110616267A
公开(公告)日：2019-12-27
申请号：CN201910684686.3
申请日：2019-07-26
申请人： 中国农业科学院蔬菜花卉研究所
IPC分类号： C12Q1/6888 , C12N15/11 , C12Q1/6851
摘要： 本发明公开了一种基于四个APN基因的小菜蛾对Bt杀虫蛋白Cry1Ac抗性的实时荧光定量PCR检测方法及其试剂盒，该试剂盒包含特异引物序列：正、反向引物如SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3所示；或如SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6所示；或如SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9所示；或如SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12所示。本发明方法检测周期短，检测数量大，需人力及样品量少，且灵敏度高、特异性强、准确可靠，能有效的检测小菜蛾对Bt杀虫蛋白Cry1Ac的抗性，适合于小菜蛾对Bt杀虫蛋白Cry1Ac抗性的早期快速诊断，可用于田间小菜蛾Bt杀虫蛋白Cry1Ac抗性的实时监控和预警预报，应用前景广泛。
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公开(公告)号：CN110592044A
公开(公告)日：2019-12-20
申请号：CN201910683005.1
申请日：2019-07-26
申请人： 中国农业科学院蔬菜花卉研究所
IPC分类号： C12N9/12 , C12N15/54 , C12N15/113 , A01N57/16 , A01P7/04
摘要： 本发明公开了一种昆虫蛋白激酶，其编码基因Fused，所述基因核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，其编码的蛋白氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；本发明还公开了Fused基因特异片段，用于dsRNA的合成，该dsRNA注入Bt Cry1Ac杀虫蛋白敏感和抗性小菜蛾3龄初幼虫体腔后，小菜蛾生长发育迟缓，并最终导致小菜蛾在幼虫期和蛹期的死亡。本发明为小菜蛾Bt抗性治理提供了新的靶标，因此具有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN110592044B
公开(公告)日：2021-06-22
申请号：CN201910683005.1
申请日：2019-07-26
申请人： 中国农业科学院蔬菜花卉研究所
IPC分类号： C12N9/12 , C12N15/54 , C12N15/113 , A01N57/16 , A01P7/04
摘要： 本发明公开了一种昆虫蛋白激酶，其编码基因Fused，所述基因核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，其编码的蛋白氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；本发明还公开了Fused基因特异片段，用于dsRNA的合成，该dsRNA注入Bt Cry1Ac杀虫蛋白敏感和抗性小菜蛾3龄初幼虫体腔后，小菜蛾生长发育迟缓，并最终导致小菜蛾在幼虫期和蛹期的死亡。本发明为小菜蛾Bt抗性治理提供了新的靶标，因此具有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN109680010A
公开(公告)日：2019-04-26
申请号：CN201811502875.6
申请日：2018-12-10
申请人： 中国农业科学院蔬菜花卉研究所
IPC分类号： C12N15/90 , C12N9/22 , A01K67/033
CPC分类号： C12N15/902 , A01K67/0339 , A01K2217/075 , A01K2227/706 , C12N9/22
摘要： 本发明公开了一种利用CRISPR/Cas9实现非模式生物小菜蛾ABCC3基因的敲除及其在Bt Cry1Ac杀虫蛋白抗性机制分子研究中的应用。本发明方法设计并合成小菜蛾ABCC3基因特异性sgRNA靶标序列，将sgRNA与Cas9蛋白混合后显微注射到小菜蛾前胚盘期卵后极部位，利用CRISPR/Cas9基因编辑系统筛选出可稳定遗传的小菜蛾ABCC3基因纯合突变种群并用于Bt Cry1Ac杀虫蛋白毒力生物测定，证实小菜蛾ABCC3基因突变可以导致其对Bt Cry1Ac杀虫蛋白产生高抗性。本发明方法简单高效，省时省力，不仅为非模式生物体内功能基因的深入研究提供技术支撑，也为探索新的害虫防治策略奠定了基础。
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公开(公告)号：CN109593762A
公开(公告)日：2019-04-09
申请号：CN201811642687.3
申请日：2018-12-29
申请人： 中国农业科学院蔬菜花卉研究所
IPC分类号： C12N15/113 , C12N15/90
CPC分类号： C12N15/113 , C12N9/485 , C12N15/902 , C12N2310/10 , C12N2310/20 , C12Y304/11
摘要： 本发明公开了一种利用CRISPR/Cas9实现非模式生物小菜蛾APN1基因的敲除及其在Bt Cry1Ac杀虫蛋白抗性机制分子研究中的应用。本发明方法设计并合成小菜蛾APN1基因特异性sgRNA靶标序列，将sgRNA与Cas9蛋白混合后显微注射到小菜蛾前胚盘期卵后极部位，利用CRISPR/Cas9基因编辑系统筛选出可稳定遗传的小菜蛾APN1基因纯合突变种群并用于Bt Cry1Ac杀虫蛋白毒力生物测定，证实小菜蛾APN1基因突变可以导致其对Bt Cry1Ac杀虫蛋白产生高抗性。本发明方法简单高效，省时省力，不仅为非模式生物体内功能基因的深入研究提供技术支撑，也为探索新的害虫防治策略奠定了基础。
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公开(公告)号：CN110616267B
公开(公告)日：2022-08-19
申请号：CN201910684686.3
申请日：2019-07-26
申请人： 中国农业科学院蔬菜花卉研究所
IPC分类号： C12Q1/6888 , C12N15/11 , C12Q1/6851
摘要： 本发明公开了一种基于四个APN基因的小菜蛾对Bt杀虫蛋白Cry1Ac抗性的实时荧光定量PCR检测方法及其试剂盒，该试剂盒包含特异引物序列：正、反向引物如SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3所示；或如SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6所示；或如SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9所示；或如SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12所示。本发明方法检测周期短，检测数量大，需人力及样品量少，且灵敏度高、特异性强、准确可靠，能有效的检测小菜蛾对Bt杀虫蛋白Cry1Ac的抗性，适合于小菜蛾对Bt杀虫蛋白Cry1Ac抗性的早期快速诊断，可用于田间小菜蛾Bt杀虫蛋白Cry1Ac抗性的实时监控和预警预报，应用前景广泛。
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公开(公告)号：CN109680009A
公开(公告)日：2019-04-26
申请号：CN201811502420.4
申请日：2018-12-10
申请人： 中国农业科学院蔬菜花卉研究所
CPC分类号： C12N15/902 , C07K14/43563
摘要： 本发明公开了一种非模式昆虫小菜蛾中用于敲除ABCC2基因的CRISPR/Cas9基因编辑系统的建立及其在Bt Cry1Ac杀虫蛋白抗性机制分子研究中的应用。所述CRISPR/Cas9基因编辑系统主要包括：小菜蛾ABCC2基因特异性sgRNA靶标序列、小菜蛾卵的显微注射方法和突变个体及其基因型的无损检测方法。将构建的可稳定遗传的小菜蛾ABCC2基因纯合突变种群用于Bt Cry1Ac杀虫蛋白毒力生物测定，结果证实小菜蛾ABCC2基因突变可以导致其对Bt Cry1Ac杀虫蛋白产生高抗性。本发明对于小菜蛾Bt Cry1Ac抗性的功能基因筛选、田间抗性水平检测以及田间防治均具有重要的理论和实践意义，应用前景广泛。
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公开(公告)号：CN109811060B
公开(公告)日：2022-06-28
申请号：CN201910121949.X
申请日：2019-02-19
申请人： 中国农业科学院蔬菜花卉研究所
IPC分类号： C12Q1/6888 , C12Q1/6851 , C12N15/11
摘要： 本发明公开了一种基于ABCB1基因的小菜蛾对Bt杀虫蛋白Cry1Ac抗性的实时荧光定量PCR检测方法及其试剂盒，所述试剂盒包含以下靶标基因特异引物序列：正向引物序列如SEQ ID NO.2所示，反向引物序列如SEQ ID NO.3所示。本发明方法，特异性强、需人力及样品量少，检测时间短，检测数量大，而且灵敏度高和准确可靠，因而能有效的检测小菜蛾对Bt杀虫蛋白Cry1Ac的抗性，适合于小菜蛾对Bt杀虫蛋白Cry1Ac抗性的早期快速诊断，同时可用于田间小菜蛾Bt杀虫蛋白Cry1Ac抗性的实时监控和预警预报，应用前景广泛。
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公开(公告)号：CN109679955B
公开(公告)日：2020-09-29
申请号：CN201811645606.5
申请日：2018-12-29
申请人： 中国农业科学院蔬菜花卉研究所
IPC分类号： C12N15/113 , C12Q1/6888 , C12N15/11
摘要： 本发明公开了一种小菜蛾Bt Cry1Ac杀虫蛋白抗性基因MAP4K4表达调控的核心启动子序列和突变位点及其在小菜蛾Bt Cry1Ac杀虫蛋白抗性鉴定和田间监测中的应用。所述突变位点位于起始密码子ATG上游的491、474、469‑470位核苷酸，分别命名为M1、M2、M3。小菜蛾Bt Cry1Ac杀虫蛋白敏感种群启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，抗性近等基因系种群启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。实验证明，M2与M3同时突变时，MAP4K4基因启动子活性显著增强。本发明推动了启动子突变在昆虫Bt抗性领域的研究，尤其在昆虫Bt抗性田间检测和治理方面有重要的理论和实践意义。
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公开(公告)号：CN109811060A
公开(公告)日：2019-05-28
申请号：CN201910121949.X
申请日：2019-02-19
申请人： 中国农业科学院蔬菜花卉研究所
IPC分类号： C12Q1/6888 , C12Q1/6851 , C12N15/11
摘要： 本发明公开了一种基于ABCB1基因的小菜蛾对Bt杀虫蛋白Cry1Ac抗性的实时荧光定量PCR检测方法及其试剂盒，所述试剂盒包含以下靶标基因特异引物序列：正向引物序列如SEQ ID NO.2所示，反向引物序列如SEQ ID NO.3所示。本发明方法，特异性强、需人力及样品量少，检测时间短，检测数量大，而且灵敏度高和准确可靠，因而能有效的检测小菜蛾对Bt杀虫蛋白Cry1Ac的抗性，适合于小菜蛾对Bt杀虫蛋白Cry1Ac抗性的早期快速诊断，同时可用于田间小菜蛾Bt杀虫蛋白Cry1Ac抗性的实时监控和预警预报，应用前景广泛。
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