公开(公告)号：CN115896178B

公开(公告)日：2023-08-25

申请号：CN202310029606.7

申请日：2023-01-09

申请人： 中国医学科学院医学生物学研究所

发明人： 吴正存 ,  马开利 ,  唐东红 ,  黄璋琼 ,  李哲丽 ,  龙维虎 ,  杜廷福 ,  胡鹏 ,  韦梦晨

IPC分类号： C12N15/867 ,  C12N5/10 ,  C12N15/89 ,  C12N15/877 ,  A01K67/027

摘要： 本发明公开了一种核定位人源α突触核蛋白转基因小鼠的构建方法，该方法在野生人源AS编码基因序列中引入核输入信号肽，采用能稳定整合目的基因的慢病毒骨架为递送系统，通过显微注射的方式，将携带核定位AS的编码基因的慢病毒注射入小鼠受精卵中，通过移植培养，获取能稳定表达核定位AS的转基因小鼠；本发明方法为研究核定位的AS与PD的病理机制提供了研究工具。

公开(公告)号：CN115896178A

公开(公告)日：2023-04-04

申请号：CN202310029606.7

申请日：2023-01-09

申请人： 中国医学科学院医学生物学研究所

发明人： 吴正存 ,  马开利 ,  唐东红 ,  黄璋琼 ,  李哲丽 ,  龙维虎 ,  杜廷福 ,  胡鹏 ,  韦梦晨

IPC分类号： C12N15/867 ,  C12N5/10 ,  C12N15/89 ,  C12N15/877 ,  A01K67/027

摘要： 本发明公开了一种核定位人源α突触核蛋白转基因小鼠的构建方法，该方法在野生人源AS编码基因序列中引入核输入信号肽，采用能稳定整合目的基因的慢病毒骨架为递送系统，通过显微注射的方式，将携带核定位AS的编码基因的慢病毒注射入小鼠受精卵中，通过移植培养，获取能稳定表达核定位AS的转基因小鼠；本发明方法为研究核定位的AS与PD的病理机制提供了研究工具。

公开(公告)号：CN114645052B

公开(公告)日：2023-05-26

申请号：CN202110751098.4

申请日：2021-07-01

申请人： 中国医学科学院医学生物学研究所

发明人： 吴正存 ,  马开利 ,  李国祥 ,  杜廷福 ,  黄璋琼 ,  潘玥 ,  胡鹏

IPC分类号： C12N15/12 ,  C12N15/864 ,  C12N15/66 ,  A01K67/027

摘要： 本发明公开一种全脑过表达核易位人源α‑突触核蛋白转基因鼠的高效构建方法本发明引入3个重复序列的核易位信号肽，通过PCR方法获取人源α‑Syn‑3*NLS编码序列，以重组腺相关病毒rAAV过表达病毒载体pAAV‑IRES‑hrGFP为基本骨架，通过双酶切位点SalⅠ和Xhol，将目的序列α‑Syn‑3*NLS构建入载体中，进行病毒包装得到过表达核易位α‑Syn的rAAV病毒，对乳鼠采用脑立体汉密顿微量注射针通过定位方法侧脑室注射该病毒，获得全脑过表达核易位人源α‑突触核蛋白转基因鼠，以解决现有过表达α‑突触核蛋白转基因小鼠制作，以及α‑突触核蛋白缺乏核输入信号，无法在核内过表达的问题。

公开(公告)号：CN115836667A

公开(公告)日：2023-03-24

申请号：CN202211624399.1

申请日：2022-12-16

申请人： 中国医学科学院医学生物学研究所

发明人： 黄璋琼 ,  唐东红 ,  叶尤松 ,  马开利 ,  李哲丽 ,  龙维虎 ,  王陈芸 ,  韦梦晨 ,  李国祥 ,  吴正存 ,  胡鹏

IPC分类号： A01K67/027 ,  C12N15/867 ,  C12N15/12

摘要： 本发明公开一种全身性过表达人源α‑Syn‑NLS转基因鼠的构建方法，本发明方法首先通过PCR方法获取人源α‑Syn编码序列和SV40核易位信号序列，再通过BP反应构建含有目的序列的入门克隆载体，酶切后，通过LR反应将入门克隆载体构建成含有目的序列的重组表达载体，再酶切后，以慢病毒LV过表达载体pLV‑EGFP:T2A:Puro‑EF1A为骨架载体，将含有目的序列的重组表达载体pDown‑hSNCA/SV40NLS构建入慢病毒载体中，进行病毒包装纯化得到过表达核输入α‑Syn的pLV病毒，采用受精卵原核注射方法注射该病毒，获得全身过表达核输入人源α‑Syn蛋白的转基因鼠，能长期稳定的过表达α‑Syn，并同时解决核输入的问题，该模型对研究α‑Syn核输入的全面功能和机制具有重要的价值。

公开(公告)号：CN114645052A

公开(公告)日：2022-06-21

申请号：CN202110751098.4

申请日：2021-07-01

申请人： 中国医学科学院医学生物学研究所

发明人： 吴正存 ,  马开利 ,  李国祥 ,  杜廷福 ,  黄璋琼 ,  潘玥 ,  胡鹏

IPC分类号： C12N15/12 ,  C12N15/864 ,  C12N15/66 ,  A01K67/027

摘要： 本发明公开一种全脑过表达核易位人源α‑突触核蛋白转基因鼠的高效构建方法本发明引入3个重复序列的核易位信号肽，通过PCR方法获取人源α‑Syn‑3*NLS编码序列，以重组腺相关病毒rAAV过表达病毒载体pAAV‑IRES‑hrGFP为基本骨架，通过双酶切位点SalⅠ和Xhol，将目的序列α‑Syn‑3*NLS构建入载体中，进行病毒包装得到过表达核易位α‑Syn的rAAV病毒，对乳鼠采用脑立体汉密顿微量注射针通过定位方法侧脑室注射该病毒，获得全脑过表达核易位人源α‑突触核蛋白转基因鼠，以解决现有过表达α‑突触核蛋白转基因小鼠制作，以及α‑突触核蛋白缺乏核输入信号，无法在核内过表达的问题。