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公开(公告)号：CN108660158B
公开(公告)日：2021-01-08
申请号：CN201810233613.8
申请日：2018-03-22
申请人： 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所 , 江苏省农业科学院
IPC分类号： C12N15/861 , C12N15/66 , A61K39/235 , A61P35/00 , A61P31/16
摘要： 本发明提供一种重组禽腺病毒FAdV‑4载体系统，包括骨架质粒pKFAV4、中间质粒pKFAV4AP和穿梭质粒pKFAV4APNM。将目的基因编码区克隆到穿梭质粒的多克隆位点，NheI酶切携带目的基因表达框的穿梭质粒，用所得片段替换中间质粒的对应部位；再用AvrII或PacI酶切携带目的基因的中间质粒，借助连接反应或DNA组装反应将所得片段替换骨架质粒的对应部位，可获得重组腺病毒质粒；PmeI线性化腺病毒质粒转染LMH细胞，能够制备由人巨细胞启动子(CMVp)控制目的基因表达的重组FAdV‑4腺病毒。在制备的重组腺病毒中，FAdV‑4基因组Orf1‑Orf2区域由目的基因表达框替代，腺病毒的其他区域保留。预计其在鸟类口服疫苗研发中具有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN108660158A
公开(公告)日：2018-10-16
申请号：CN201810233613.8
申请日：2018-03-22
申请人： 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所 , 江苏省农业科学院
IPC分类号： C12N15/861 , C12N15/66 , A61K39/235 , A61P35/00 , A61P31/16
摘要： 本发明提供一种重组禽腺病毒FAdV-4载体系统，包括骨架质粒pKFAV4、中间质粒pKFAV4AP和穿梭质粒pKFAV4APNM。将目的基因编码区克隆到穿梭质粒的多克隆位点，NheI酶切携带目的基因表达框的穿梭质粒，用所得片段替换中间质粒的对应部位；再用AvrII或PacI酶切携带目的基因的中间质粒，借助连接反应或DNA组装反应将所得片段替换骨架质粒的对应部位，可获得重组腺病毒质粒；PmeI线性化腺病毒质粒转染LMH细胞，能够制备由人巨细胞启动子(CMVp)控制目的基因表达的重组FAdV-4腺病毒。在制备的重组腺病毒中，FAdV-4基因组Orf1-Orf2区域由目的基因表达框替代，腺病毒的其他区域保留。预计其在鸟类口服疫苗研发中具有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN111218477B
公开(公告)日：2022-02-18
申请号：CN202010165467.7
申请日：2020-03-11
申请人： 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所
IPC分类号： C12N15/861 , C12N15/66 , A61K48/00 , A61K39/00
摘要： 本发明公开了靶向感染哺乳动物细胞的禽4型腺病毒载体及其应用，载体包括禽4型腺病毒的基因组序列、pBR322的复制起点核酸序列和卡那霉素抗性核酸序列；所述基因组序列中的fiber核酸序列经过人工改造，包括：在fiber基因Knob区中插入RGD4C短肽核酸序列，和/或，将fiber基因Knob区替换为人35型腺病毒fiber Knob的核酸序列。本发明改造后的禽4型腺病毒载体能够提高对哺乳动物细胞的感染效率，可以用于制备哺乳动物的重组疫苗或基因治疗试剂盒。
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公开(公告)号：CN108048483B
公开(公告)日：2021-02-02
申请号：CN201810092715.2
申请日：2018-01-30
申请人： 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所 , 北京知光基因科技有限公司
IPC分类号： C12N15/861
摘要： 本发明提供一种复制型重组腺病毒HAdV‑5载体系统，其包括骨架质粒pKAd5、中间质粒pMDXE3YA和穿梭质粒pKNXE3M。将目的基因编码区克隆到穿梭质粒的多克隆位点，EcoRI酶切携带目的基因的穿梭质粒，用所得片段替换中间质粒的对应部位；再用NdeI酶切新构建的中间质粒，用所得片段替换骨架质粒的对应部位，可获得重组腺病毒质粒；PacI线性化的重组腺病毒质粒转染293细胞，能够制备由HAdV‑5主要晚期启动子(MLP)控制目的基因表达的重组HAdV‑5腺病毒。该重组腺病毒在各种人类细胞中均可以复制增殖，是复制型病毒，预计其在动物口服载体疫苗研发中具有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN109762842B
公开(公告)日：2020-11-06
申请号：CN201811430086.6
申请日：2018-11-28
申请人： 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所
IPC分类号： C12N15/861 , A61K39/00 , A61P33/10
摘要： 提供一种复制型人41型腺病毒(HAdV‑41)载体系统及重组病毒构建方法。载体系统包括腺病毒质粒pKAd41P5A‑CG。该质粒含有人工改造的HAdV‑41基因组：E1区和E4区启动子由HAdV‑5对应序列替换；E3区由HAdV‑5的ADP基因替换；在E1B55K和pIX基因之间添加人巨细胞病毒启动子和绿色荧光蛋白编码区(pGFP)，pGFP两端各含有一个MluI酶切位点。设计引物，PCR扩增外源基因序列(pTransgene)，该片段两端含有MluI位点并且与pKAd41P5A‑CG MluI位点两侧存在约30bp重叠区。使用MluI酶切/连接，或通过Gibson组装方法，可将pKAd41P5A‑CG中pGFP替换为pTransgene，制备携带外源基因的腺病毒质粒；将PmeI线性化的质粒转染包装细胞，能够拯救复制型HAdV‑41重组病毒。预计本载体系统可以用于制备人或哺乳动物的口服载体疫苗。
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公开(公告)号：CN109762842A
公开(公告)日：2019-05-17
申请号：CN201811430086.6
申请日：2018-11-28
申请人： 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所
IPC分类号： C12N15/861 , A61K39/00 , A61P33/10
摘要： 提供一种复制型人41型腺病毒(HAdV-41)载体系统及重组病毒构建方法。载体系统包括腺病毒质粒pKAd41P5A-CG。该质粒含有人工改造的HAdV-41基因组：E1区和E4区启动子由HAdV-5对应序列替换；E3区由HAdV-5的ADP基因替换；在E1B55K和pIX基因之间添加人巨细胞病毒启动子和绿色荧光蛋白编码区(pGFP)，pGFP两端各含有一个MluI酶切位点。设计引物，PCR扩增外源基因序列(pTransgene)，该片段两端含有MluI位点并且与pKAd41P5A-CG MluI位点两侧存在约30bp重叠区。使用MluI酶切/连接，或通过Gibson组装方法，可将pKAd41P5A-CG中pGFP替换为pTransgene，制备携带外源基因的腺病毒质粒；将PmeI线性化的质粒转染包装细胞，能够拯救复制型HAdV-41重组病毒。预计本载体系统可以用于制备人或哺乳动物的口服载体疫苗。
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公开(公告)号：CN101619324B
公开(公告)日：2013-06-26
申请号：CN200810126855.3
申请日：2008-07-01
申请人： 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所
IPC分类号： C12N15/861 , C12N5/10 , C12N7/01
摘要： 本发明涉及基因治疗和重组疫苗领域中一种复制缺陷型重组腺病毒Ad41载体系统及其应用。具体而言，本发明提供的载体系统包括一个骨架质粒、一个穿梭质粒和一个包装细胞系，其中所述骨架质粒含有缺失了腺病毒包装所需编码区的腺病毒Ad41基因组，所述穿梭质粒含有用于插入目的基因的多克隆位点以及用于与骨架质粒发生同源重组的腺病毒Ad41基因组片段，所述包装细胞系在细胞基因组中整合了所述腺病毒Ad41包装所需基因并能稳定表达该包装基因。本发明产生的重组Ad41病毒在肠道基因治疗和口服重组疫苗研究中有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN117512013A
公开(公告)日：2024-02-06
申请号：CN202211232848.8
申请日：2022-10-10
申请人： 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所
摘要： 本发明属于重组腺病毒疫苗领域，具体地说，涉及一种重组5型腺病毒载体、制备方法、疫苗及其应用。重组5型腺病毒载体以复制缺陷的5型腺病毒载体为基础，插入诺如病毒的VP1基因；在所述VP1基因的3’端串联连接由U6启动子启动的dsRNA序列；和/或，在所述VP1基因的5’端连接信号肽序列。本发明中构建的包含dsRNA佐剂和/或信号肽基因的诺如病毒重组5型腺病毒载体，能够大大提高诺如病毒的VP1蛋白的表达量，能够显著诱导黏膜免疫应答，提升整体免疫效果，可以用于制备诺如病毒的口服疫苗等。
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公开(公告)号：CN113637705A
公开(公告)日：2021-11-12
申请号：CN202110951548.4
申请日：2021-08-19
申请人： 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所
IPC分类号： C12N15/861 , C12N15/65 , C12N5/10
摘要： 本发明提供一种猴1型腺病毒SAdV‑1载体系统，包括腺病毒质粒pKSAV1‑EG和包装细胞系293SE13。靶基因编码区可通过DNA组装或限制性酶切‑连接克隆插入pKSAV1‑EG质粒SpeI限制性内切酶切割位点，产生携带靶基因的腺病毒质粒；包含表达调控序列的外源基因表达框可类似插入pKSAV1‑EG的FseI位点，产生携带外源基因表达框的腺病毒质粒。将SwaI线性化的腺病毒质粒转染293SE13细胞，拯救重组病毒；293SE13也用于扩增重组病毒。产生的SAdV‑1病毒基因组E1/E3部位缺失，是复制缺陷型病毒。人类缺乏对SAdV‑1的预存免疫力，SAdV‑1的靶细胞与常用HAdV‑5载体不同，预计本载体系统在基因治疗和载体疫苗领域有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN113388641B
公开(公告)日：2022-10-21
申请号：CN202110734887.7
申请日：2021-06-30
申请人： 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所 , 北京市农林科学院
摘要： 本发明公开了一种禽4型腺病毒载体、构建方法及其减毒活疫苗和应用。本发明的禽4型腺病毒载体包括pBR322质粒的复制起点核酸序列、卡那霉素抗性基因核酸序列和禽4型腺病毒的基因组序列；所述禽4型腺病毒的基因组序列中，ORF1，ORF1B，ORF2，ORF19A以及GAM‑1基因均失活。将线性化后的禽4型腺病毒载体转染细胞后拯救获得的禽4型腺病毒作为减毒活疫苗，不具备致病性，安全性高，具有很好的免疫保护效果，可以用于制备预防禽腺病毒感染引起的疾病的药物。
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