公开(公告)号：CN117050978A

公开(公告)日：2023-11-14

申请号：CN202311022118.X

申请日：2023-08-14

Applicant: 仲恺农业工程学院

Inventor： 谢曦 ,  王琴 ,  陈碧翰 ,  刘袆帆 ,  刘东杰 ,  王锋

IPC: C12N9/44 ,  C12N15/56 ,  C12N15/81 ,  C12N15/64 ,  C12N15/62 ,  C12N1/19 ,  C12P19/60 ,  C12R1/84

Abstract: 本发明属于基因工程及酶工程技术领域，具体涉及一种微藻来源的α‑L‑鼠李糖苷酶的制备方法及该表面展示酶在二氢黄酮甙生物催化转化中的应用。本发明将源于赫氏圆石藻的α‑L‑鼠李糖苷酶基因EhRha与锚定蛋白基因Aga1相连，并插入酵母表达载体pPIC9K中构建成表面展示载体并转化毕赤酵母GS115，并利用甲醇诱导目的基因表达，表达产物离心、去除上清后即获得固定在细胞上的重组赫氏圆石藻α‑L‑鼠李糖苷酶(EhRha)。该重组酶EhRha在pH＝6.0～8.0，20～35℃反应条件下有较高酶活。利用12mg(湿重)展示酶在pH＝7，30℃下反应12h，二氢黄酮甙几乎减半，解决了目前α‑L‑鼠李糖苷酶纯度低、活性不稳定、重复利用率低、溶剂污染和高温副产物增多等技术问题，拓宽了α‑L‑鼠李糖苷酶在生产加工中的应用。