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公开(公告)号：CN113528347B
公开(公告)日：2023-04-18
申请号：CN202110722267.1
申请日：2021-06-28
申请人： 佛山市正典生物技术有限公司
IPC分类号： C12N1/11 , C12N1/02 , A61K39/012 , A61P33/02 , C12R1/90
摘要： 本发明属于球虫技术领域，公开了一种提高荧光艾美耳球虫卵囊分选成功率的方法和应用，该方法包括以下步骤：将含有转基因艾美耳球虫卵囊的粪便进行球虫分离，得到球虫卵囊液A；将球虫卵囊液A进行孢子化，计数，稀释，得到卵囊液B；将卵囊液B静置，加入饱和食盐水，吹打，静置，取漂浮的卵囊加入水，离心后取沉淀，稀释，再进行单卵囊分离，得到目标卵囊；将目标卵囊经口感染SPF鸡进行传代，即得。本发明通过对含有转基因艾美耳球虫卵囊进行球虫分离，再进行孢子化，加入饱和食盐水，吹打后卵囊浮起，静置后收集卵囊，再通过单卵囊分离技术，经口感染SPF鸡进行传代，传代后的卵囊含荧光率增加到50％。
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公开(公告)号：CN114181939B
公开(公告)日：2024-02-02
申请号：CN202111500863.1
申请日：2021-12-09
申请人： 佛山市正典生物技术有限公司
IPC分类号： C12N15/113 , C12N9/22 , C12N15/12 , C12N15/65 , C12N15/85 , C12N15/90 , C12Q1/686 , G01N21/64
摘要： 本发明提供一种表达NA4蛋白和荧光标签的重组球虫载体及其检测方法，属于基因工程技术领域。本发明提供一种靶向ETH_00009555基因的sgRNA，可以进行精确的基因定点突变；由sgRNA、Cas9和同源重组片段建立基因编辑系统，可精确地将毒害艾美耳球虫的NA4蛋白和荧光标签蛋白等同源片段同源重组于ETH_00009555基因，构建一种表达NA4蛋白和荧光标签的重组球虫载体。所述重组球虫载体DNA经过PCR检测和测序，表明已成功重组于ETH_00009555基因；且重组球虫载体在荧光显微镜下具有明显的荧光信号，表明其已成功表达NA4蛋白和荧光标签蛋白。
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公开(公告)号：CN114107304B
公开(公告)日：2024-02-02
申请号：CN202111500397.7
申请日：2021-12-09
申请人： 佛山市正典生物技术有限公司
IPC分类号： C12N15/113 , C12N9/22 , C12N15/55 , C12N15/65 , C12N15/85 , C12N15/90 , C12Q1/686 , G01N21/64
摘要： 本发明提供一种表达α毒素蛋白和荧光标签蛋白的重组球虫载体及其检测方法，属于基因工程技术领域。本发明提供一种靶向ETH_00009555基因的sgRNA，所述靶向ETH_00009555基因的sgRNA的靶点位于ETH_00009555基因，可以进行精确的基因定点突变；由sgRNA、Cas9和同源重组片段建立基因编辑系统，可精确地将目的片段同源重组于ETH_00009555基因；构建一种表达α毒素蛋白和荧光标签蛋白的球虫载体，所述重组球虫载体的DNA中成功重组了目的基因，且在荧光显微镜下具有明显的荧光信号，表明其已成功表达α毒素蛋白和荧光标签蛋白。
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公开(公告)号：CN114181938B
公开(公告)日：2022-11-15
申请号：CN202111500407.7
申请日：2021-12-09
申请人： 佛山市正典生物技术有限公司
IPC分类号： C12N15/113 , C12N9/22 , C12N15/12 , C12N15/65 , C12N15/85 , C12N15/90 , C12Q1/686 , G01N21/64
摘要： 本发明提供一种表达R7蛋白和荧光标签的重组球虫载体及其检测方法，属于基因工程技术领域。本发明提供一种靶向ETH_00009555基因的sgRNA，可以进行精确地基因定点突变；由sgRNA和同源重组片段建立基因编辑系统，可精确地将卡氏住白细胞虫的R7蛋白和荧光标签蛋白等目的片段同源重组于ETH_00009555基因，构建一种表达R7蛋白和荧光标签的重组球虫载体。所述重组球虫载体DNA经过PCR检测和测序，表明R7基因和荧光标签基因已成功重组于ETH_00009555基因；且重组球虫载体在荧光显微镜下具有明显的荧光信号，表明其已成功表达R7蛋白和荧光标签蛋白。
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公开(公告)号：CN114181938A
公开(公告)日：2022-03-15
申请号：CN202111500407.7
申请日：2021-12-09
申请人： 佛山市正典生物技术有限公司
IPC分类号： C12N15/113 , C12N9/22 , C12N15/12 , C12N15/65 , C12N15/85 , C12N15/90 , C12Q1/686 , G01N21/64
摘要： 本发明提供一种表达R7蛋白和荧光标签的重组球虫载体及其检测方法，属于基因工程技术领域。本发明提供一种靶向ETH_00009555基因的sgRNA，可以进行精确地基因定点突变；由sgRNA和同源重组片段建立基因编辑系统，可精确地将卡氏住白细胞虫的R7蛋白和荧光标签蛋白等目的片段同源重组于ETH_00009555基因，构建一种表达R7蛋白和荧光标签的重组球虫载体。所述重组球虫载体DNA经过PCR检测和测序，表明R7基因和荧光标签基因已成功重组于ETH_00009555基因；且重组球虫载体在荧光显微镜下具有明显的荧光信号，表明其已成功表达R7蛋白和荧光标签蛋白。
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公开(公告)号：CN114107304A
公开(公告)日：2022-03-01
申请号：CN202111500397.7
申请日：2021-12-09
申请人： 佛山市正典生物技术有限公司
IPC分类号： C12N15/113 , C12N9/22 , C12N15/55 , C12N15/65 , C12N15/85 , C12N15/90 , C12Q1/686 , G01N21/64
摘要： 本发明提供一种表达α毒素蛋白和荧光标签蛋白的重组球虫载体及其检测方法，属于基因工程技术领域。本发明提供一种靶向ETH_00009555基因的sgRNA，所述靶向ETH_00009555基因的sgRNA的靶点位于ETH_00009555基因，可以进行精确的基因定点突变；由sgRNA、Cas9和同源重组片段建立基因编辑系统，可精确地将目的片段同源重组于ETH_00009555基因；构建一种表达α毒素蛋白和荧光标签蛋白的球虫载体，所述重组球虫载体的DNA中成功重组了目的基因，且在荧光显微镜下具有明显的荧光信号，表明其已成功表达α毒素蛋白和荧光标签蛋白。
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公开(公告)号：CN114181939A
公开(公告)日：2022-03-15
申请号：CN202111500863.1
申请日：2021-12-09
申请人： 佛山市正典生物技术有限公司
IPC分类号： C12N15/113 , C12N9/22 , C12N15/12 , C12N15/65 , C12N15/85 , C12N15/90 , C12Q1/686 , G01N21/64
摘要： 本发明提供一种表达NA4蛋白和荧光标签的重组球虫载体及其检测方法，属于基因工程技术领域。本发明提供一种靶向ETH_00009555基因的sgRNA，可以进行精确的基因定点突变；由sgRNA、Cas9和同源重组片段建立基因编辑系统，可精确地将毒害艾美耳球虫的NA4蛋白和荧光标签蛋白等同源片段同源重组于ETH_00009555基因，构建一种表达NA4蛋白和荧光标签的重组球虫载体。所述重组球虫载体DNA经过PCR检测和测序，表明已成功重组于ETH_00009555基因；且重组球虫载体在荧光显微镜下具有明显的荧光信号，表明其已成功表达NA4蛋白和荧光标签蛋白。
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公开(公告)号：CN113528347A
公开(公告)日：2021-10-22
申请号：CN202110722267.1
申请日：2021-06-28
申请人： 佛山市正典生物技术有限公司
IPC分类号： C12N1/11 , C12N1/02 , A61K39/012 , A61P33/02 , C12R1/90
摘要： 本发明属于球虫技术领域，公开了一种提高荧光艾美耳球虫卵囊分选成功率的方法和应用，该方法包括以下步骤：将含有转基因艾美耳球虫卵囊的粪便进行球虫分离，得到球虫卵囊液A；将球虫卵囊液A进行孢子化，计数，稀释，得到卵囊液B；将卵囊液B静置，加入饱和食盐水，吹打，静置，取漂浮的卵囊加入水，离心后取沉淀，稀释，再进行单卵囊分离，得到目标卵囊；将目标卵囊经口感染SPF鸡进行传代，即得。本发明通过对含有转基因艾美耳球虫卵囊进行球虫分离，再进行孢子化，加入饱和食盐水，吹打后卵囊浮起，静置后收集卵囊，再通过单卵囊分离技术，经口感染SPF鸡进行传代，传代后的卵囊含荧光率增加到50％。
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